【简介】

三聚氰胺是一种合成有机含氮杂环化合物，含氮量很高（达66％），加之其生产工艺简单、成本很低，在采用凯氏定氮法测定粗蛋白时，可提高表观粗蛋白含量；不法生产商为了降低生产成本，提高经济效益，在原料奶及其它生产加工环节中非法加入三聚氰胺。一次大量摄入或长期摄入三聚氰胺会造成生殖、泌尿系统的损害，膀胱、肾部结石，并可进一步诱发膀胱癌。

【检测原理】

该试剂盒采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术进行检测。

【检测范围】

1、固体样品：饲料、饲料原料、奶粉、蛋糕、奶茶粉等固态样品。

2、液体样品：液态生鲜奶、酸奶、巧克力奶、咖啡奶等液态奶制品。

3、生鲜蛋类等。

【技术指标】 检测下限：1.5-2 mg/kg

【检测步骤】

1、 样品处理

固体样品：向三聚氰胺试剂A瓶中加入2.0mL纯净水或蒸馏水，称取粉碎的样品0.5 g于三聚氰胺试剂A瓶中，摇动至少1分钟后，静置分层，取2mL上清液到5mL离心管中，加2mL三聚氰胺试剂B，混匀，待过固相萃取柱。

液体样品：向试剂A瓶中加入0.5mL纯净水或蒸馏水，吸取液体样品约1mL于三聚氰胺试剂A瓶中，摇动至少1分钟后，静置分层，取2mL上清液到5mL离心管中，加2mL三聚氰胺试剂B，混匀，待过固相萃取柱。

生鲜蛋类样品：向三聚氰胺试剂A瓶中加入0.5mL纯净水或蒸馏水，将待测定的生鲜鸡蛋蛋清打入玻璃杯内搅匀，用盒内吸管吸取约1mL样品于三聚氰胺试剂A瓶中，摇动至少1分钟后，静置分层，取2mL上清液到5mL离心管中，加2mL三聚氰胺试剂B，混匀，待过固相萃取柱。

2、固相萃取柱处理

取出一支三聚氰胺固相萃取柱，用吸管向萃取柱中加入2mL三聚氰胺试剂B，用洗耳球在萃取柱上端加压使液体呈滴状自下端出液口匀速流出，流出液弃去。（注意：不要将柱内填料层的液体挤干，应使柱内填料层保持湿润状态）

3、净化

将步骤1中的待检液分次加入已处理好的萃取柱中，用洗耳球加压，使液体呈滴状自下端出液口匀速流出，将萃取柱用洗耳球挤干，然后用吸管向萃取柱中加2.5mL三聚氰胺试剂C，洗耳球加压使三聚氰胺试剂C呈滴状自下端出液口匀速流出，用5mL离心管接收流出液。然后用吸管向5mL离心管中加0.5mL三聚氰胺缓冲液，加1.75mL三聚氰胺试剂D，压紧离心管盖子，上下用力震荡50次以上，静置2分钟，待其自然分层，用吸管将上层溶液取出弃去，再用吸管向5mL离心管中加1.75mL三聚氰胺试剂D，压紧离心管盖子，上下用力震荡50次以上，静置2分钟，待其自然分层。

4、判断：

用吸管吸取待检样品下层溶液，滴加3～4滴（约100μl）于加样孔中，加样后开始计时；结果应在10分钟后读取，其他时间判读无效；

Ø 阴性: 测试线(T)比对照线(C)颜色深或一样深，表明样品中三聚氰胺的浓度小于1.5mg／kg。

Ø 阳性: 测试线(T)明显浅于对照线(C)，或只有对照线(C),无测试线(T)，表明样品中三聚氰胺的浓度大于1.5mg／kg。

Ø 无效: 对照线(C)和测试线(T)都不出现。或者对照线（C）不出现。

【注意事项】

Ø 试剂在4-30℃阴凉干燥处常温保存，有效期为1年。

Ø 三聚氰胺试剂B、C和D可固定使用对应的吸管，切忌交叉使用。5mL离心管、固相萃取柱不可重复使用。

Ø 液体在过固相萃取柱时，若发现堵柱现象时，相应的萃取柱作废。

Ø 按“步骤1”吸取上清液时，吸管头位于液面表层，以避免沉淀物吸入，从而导致萃取柱堵塞。

Ø 固相萃取净化的过程中液体流速控制很重要，不可过快，应控制好在出口处液滴匀速下落。

Ø 生鲜奶在常温下易酸败，初筛应尽快进行。4℃冰箱保存的生鲜奶48小时内应完成检测。若产生局部结块、发泡的变化，不可用于进行初筛。

Ø 提取和萃取时使用漩涡混合器，提取和萃取效果会更好。

Ø 如果检测出疑是阳性样品，建议在实验室用仪器方法进一步确认。

Ø 在使用试剂时，必须注意安全，若不小心将试剂溅到皮肤上时，要立即用清水冲洗；

【三聚氰胺标准品配置方法】

Ø 三聚氰胺标准贮备溶液的配置：准确称取100mg三聚氰胺标准品，用甲醇定溶到100mL容量瓶中，既是1000ppm三聚氰胺标准贮备溶液。

Ø 三聚氰胺标准工作溶液的配置：取适量三聚氰胺储备溶液用蒸馏水稀释既得三聚氰胺标准工作溶液。

【试剂盒装箱单】

规格：20 样/盒

名称　数量　单位　名称　数量　单位

三聚氰胺试剂A　20 　瓶　5mL离心管　40 　个

三聚氰胺试剂B　2 　瓶　吸管　40 　个

三聚氰胺试剂C　1 　瓶　三聚氰胺试剂D　5 　瓶

固相萃取柱　20 　个　洗耳球　1 　个

三聚氰胺缓冲液液　1　瓶　检测板　20　个

说明书　1　张