简介

米酵菌酸的毒性

米酵菌酸的测定

简介

CAS登录号： 11076-19-0

中文名称： 米酵菌酸

英文名称： BONGKREKIC ACID

别名： (r-(r*,s*(e,z,z,e,e,z,e)))--trimethyl;2,4,8,10,14,18,20-docosaheptaenedioicacid,20-(carboxymethyl)-6-methoxy-2,5,17;3-carboxymethyl-17-methoxy-6,18,21-trimethyldocosa-2,4,8,12,14,18,20-heptaen;edioica

产品分子结构：

分 子 式： C28H38O7

分 子 量： 486.6

米酵菌酸的毒性

椰毒假单胞菌酵米面亚种

发酵玉米面制品、变质鲜银耳及其它变质淀粉类制品是引起中毒的主要原因，常见的食品有糯米面汤圆、吊浆粑、小米或高粱米面制品、马铃薯粉条、甘薯淀粉等。

毒性：椰毒假单胞菌产生一种叫米酵菌酸的毒素，损害人的肝、脑、肾等器官。米酵菌酸耐热，一般烹调方法不能破坏其毒性，但日晒两日后可去除94%以上变质银耳中的毒素。椰毒假单胞菌酵米面亚种食物中毒多发生在夏、秋季节。潮湿、阴雨的天气，再加上储存不好，椰毒假单胞菌在食物中大量地生长繁殖，吃了这种食物就会发生中毒。

中毒表现：进食后2~24小时出现上腹不适，恶心、呕吐（呕吐为胃内容物，重者呈咖啡色样物），轻微腹泻、头晕、全身无力等。重者可出现皮肤黄染、肝脾肿大、皮下出血、呕血、血尿、少尿、意识不清、烦躁不安、惊厥、抽搐、休克等，体温一般不升高，病死率高达40%~100%。

紧急处理：立即手法或药物催吐，催吐后口服活性炭，并尽快到医院治疗。凡与患者吃过同种食物的人，不论是否发病，一律送往医院观察、治疗。

中毒预防：严禁用浸泡、霉变的玉米制作食品。家庭制备发酵谷类食品时要勤换水，保持卫生，要保证食物无异味产生，最好的预防措施是不制作、不食用酵米面。禁止出售发霉变质的鲜银耳。学会正确辨别银耳的质量。正常干银耳水泡发后，朵形完整、较大，菌片呈白色或微黄，弹性好，无异味；变质银耳不成形、发黏、无弹性，菌片呈深黄至黄褐色，有异臭味。发好的银耳要充分漂洗，食用前要摘除银耳的基底部

米酵菌酸的测定

椰毒假单胞菌酵米面亚种产生的一种可以引起食物中毒的毒素。系统命名为：3-羧甲基-17-甲氧基-6，18，21-三甲基-廿二碳-2，4，8，12，14，18-七烯二酸。

1. 薄层色谱测定

（1）原理：样品中的米酵菌酸经提取、净化及浓缩后，根据其在短波紫外光GF254硅胶薄层色谱上显示黑色点的最低检出量测定含量。

（2）仪器

① 层析槽（内径长25cm×宽6cm×高4cm）；

② GF254硅胶薄层（50mm×200mm×0.3mm），自制，经110~115℃活化2~3h，置干燥器中可保存一周；

③ 紫外线灯（波长254nm）；

④ 紫外分光光度计。

（3）试剂

硅胶　GF254层析用：

薄层色谱展开剂：石油醚-无水乙醚-冰乙酸（60＋40＋1.5V/V）；

① 米酵菌酸标准液：称取米酵菌酸标准品，用甲醇配制成每毫升含有米酵菌酸20ｕg作测定用。置于4℃冰箱中避光保存；

② 甲醇：分析纯；

③ 冰乙酸：分析纯；

④ 石油醚：分析纯，沸程30~60℃；

⑤ 无水乙醚：分析纯；

⑥ 三氯甲烷：分析纯；

⑦ 85％磷酸：分析纯；

⑧ 4％碳酸氢钠水溶液；

⑨ 6mol/L盐酸：分析纯。

（4）米酵菌酸的提取：酵米面、干银耳样品经粉碎过40目筛后，称取20g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇20mL，于室温中避光浸泡1h，然后再加入三氯甲烷80mL和85％磷酸0.2mL；称取10g经剪碎、磨细及混匀后的鲜银耳，加入甲醇16mL于室温中避光浸泡1h，然后再加入三氯甲烷64mL和85％磷酸0.16mL，振荡30min，过滤，取滤液40~50mL。

将以上滤液移入分液漏斗中，加入与滤液体积相同的4％碳酸氢钠水溶液，振摇2min，静置分层，用带自动控制球吸管吸出上层于另一分液漏斗中，再用4％碳酸氢钠水溶液重复提取两次，每次10mL，轻摇，静置，将三次碳酸氢钠水层合并，加入三氯甲烷25mL，振摇2min，静置分层后弃去三氯甲烷层。于分液漏斗中慢慢滴入6mol/L盐酸调该溶液pH至2~3，加入石油醚（沸程30~60℃）40~50mL，振摇3min，静置分层，吸出石油醚层于梨形瓶中，再重复用石油醚30mL和20mL各提取一次，将石油醚层并入同一瓶中，于40℃水浴中减压吹气浓缩至干，用甲醇移至带1mL刻度的浓缩管中，于40℃用减压法浓缩至0.2mL以下，并用少许甲醇洗管壁，继续浓缩至干，加甲醇0.125mL，将干物质溶解，混匀，作为样液以供薄层色谱测定用。

（2）薄层色谱测定

用微量注射器滴加20μ g/mL标准液8ｕL与10ｕL两个点，以及两个样液点，每点10ｕL（鲜银耳样品滴加20μL）。用展开剂展开16cm，取出挥干。在254nm紫外灯光下观察结果如下：①标准点应出现黑色点；②如样点在标准点相应位置上未出现黑色点，则样品中米酵菌酸的含量在测定方法灵敏度0.25ｕg/g以下；如在相应位置上有黑色点，而另一点中样液与标准点重叠，则为阳性。根据样液黑色点的强度估计减少滴加微升数，或经稀释后再滴入不同微升数，直至样液与标准色点的强度与面积一致为止。米酵菌酸的比移值为0.22。

（6）计算公式

………（1）

式中：0.2――米酵菌酸的最低检出量，ｕg；

V1――加入甲醇溶解的体积，mL；

V2――出现最低检出量时滴加样液的体积，mL；

D――样液的总稀释倍数；

M――甲醇溶解时相当样品的质量，g。

（7）确证试验：对含量高的样品可以进一步做确证试验。将剩余的阳性样液与空白甲醇液分别经薄层分离后，刮下并收集与米酵菌酸标准相应的色谱带与空白处硅酸。各加甲醇4mL，于室温中浸泡1~2h，混匀，离心，吸出上清液，以空白硅胶甲醇洗脱液作对照，用紫外分光光度计测定，应在267nm与236nm处有米酵菌酸的两个最高吸收峰。

2. 高效液相色谱测定法

（1）原理：样品中的米酵菌酸经提取、净化及浓缩后，根据在高效液相色谱上的出峰面积测定含量。

（2）仪器

① 高效液相色谱仪；

② 20μL样品环；

③ 分光光度检定器，调波长至267nm；

④ 求积仪；

⑤ 防护柱4.6mmID×5cm，内装C-18硅胶10μm；

⑥ 分析柱Altex Ultrasphere　TM-ODS5ｕm，4.6mmID×25cm。

（3）试剂

① 高效液相色谱洗脱剂：甲醇-水-冰乙酸[75＋27＋1.7（V/V）]；在配制前，所用试剂及水均需分别重蒸馏。

② 米酵菌酸标准液：称取米酵菌酸标准品，用甲醇配制成每毫升含有米酵菌酸20μg作测定用。置于4℃冰箱中避光保存；

③ 甲醇：分析纯；

④ 冰乙酸：分析纯；

⑤ 石油醚：分析纯，沸程30~60℃；

⑥ 无水乙醚：分析纯；

⑦ 三氯甲烷：分析纯；

⑧ 85％磷酸：分析纯；

⑨ 4％碳酸氢钠水溶液；

⑩ 6mol/L盐酸：分析纯。

（4）米酵菌酸的提取

同薄层色谱法，但最后用甲醇转移时，直接于瓶内加入甲醇0.5mL，将干物质溶解，混匀。取出上清液经离心后，置小试管中，作为样液，供高效液相色谱测定用。

（5）高效液相色谱测定

高效液相色谱操作条件：流速1.1mL/min，纸速0.5cm/min，检定器灵敏度为将10μg/mL标准液20μL调至满刻度的70％~90％。在做高效液相色谱时，首先用洗脱液平衡分析柱，从进样口分别进入不同浓度的标准液与样液各20μL。在米酵菌酸标准峰面积的直线范围内，将样液与标准的峰面积相比，以求出样品中米酵菌酸的含量。米酵菌酸的保留时间为17min。

（6）计算公式

……（2）

式中：C――米酵菌酸标准溶液的浓度，ｕg/mL；

A――样液的峰面积；

S――米酵菌酸标准溶液的峰面积；

V――加入甲醇溶解的体积，mL；

D――样液的总稀释倍数,屏风；

M――甲醇溶解时相当样品的重量，g。

（7）确证：如阳性样品还需用薄层色谱法中样液与标准点重叠的方法确证。