词条 | 高保真Taq酶 |
释义 | 高保真Taq酶保真性的一个通用标准是错配率,错配率越低保真性越好 普通Taq酶的错配率在10-5碱基/循环数,而高保真Taq酶错配率可降到10-6数量级,大大降低了出错的可能性;它适合对PCR保真性要求较高的实验,如基因筛选、测序、突变检测等 高保真Taq酶的保真原理是:高保真Taq酶具有3'到5'核酸外切酶的活性,PCR扩增途中如果产生了错配的碱基,它可以将其切掉,从而保证了扩增的准确性;需要提醒的是由于此酶具有核酸外切酶功能,往往扩增效率低一些,有的还会降解引物,而且产物一般不宜用TA或UA克隆法克隆 高保真Taq酶的外切活性会导致PCR反应之后不会加尾,所以如果要进行TA克隆,要先进行PCR产物回收(否则影响加尾),然后回收产物用普通Taq酶72度保温一段时间,从而利用普通Taq酶加尾的活性。 目前主要有2类产品:一类是混合型的高保真酶,将带有Proofreading活性的酶与普通Taq酶(用于提高扩增效率)混合起来;另一类是单一型的高保真酶。 |
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