释义

富尔根反应原理(配制试剂： 染色步骤：)

富尔根反应-相关内容

释义

富尔根氏反应 Feulgen′s reaction

指由R.Feulgen和H.Rossenbeck（1924）提出的鉴定DNA的细胞化学反应。将细胞用 RNHCl在60℃下水解（水解时间由固定液而定）。如用Schi－ff′s试剂来作用，由于嘌呤碱基特异性的游离所生成的脱氧核糖的醛基与复红（fuchsin）反应，核染色体染成紫红色，表示DNA的存在。对由在最适条件基础上的富尔根反应所显色的DNA，可用显微分光测定法进行定量。

富尔根反应原理

显示DNA的传统方法是富尔根（Feulgen）反应，切片先用稀盐酸处理，DNA经弱酸（1mol/L HCL）水解后，在60℃条件下使DNA分子中脱氧核糖与嘌呤之间的连接打开，脱氧核糖的一端释放出醛基，并在原位与Schiff试剂反应生成紫红色产物。原理同PAS反应，使细胞核DNA显紫红色。在此过程中RNA不受影响，故染色具有DNA特异性。准确的温度和盐酸浓度，适宜的水解时间是成功的关键。水解过度或不足均降低染色强度。

配制试剂：

1. 1mol/L HCL：将8.5ml浓盐酸和91.5ml蒸馏水混合即得；

2. 0.5%亮绿水溶液；

染色步骤：

1. 取培养于盖玻片上的贴壁原代细胞，用Hanks液漂洗三次；

2. 在卡诺（Carnoy）固定液中固定10min，然后蒸馏水洗三次；

3. 移入60℃浓度为1mol/L的HCL中静置10min；

4. 用蒸馏水漂洗几次；

5. 放入Schiff试剂中静置30—60min，可随时检查显色情况；

6. 用自来水冲洗5min；

7. 再用蒸馏水漂洗；

8. 不同浓度梯度乙醇溶液脱水；

9. 用二甲苯透明、树胶封片；

富尔根反应-相关内容

脱氧戊糖核酸，缩写 DNA。指核酸的戊糖部分为D-2-脱氧核糖而言。是基因的本质物质。碱基有腺嘌呤、鸟便嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶和其它成分，有少量的甲基化碱基，即5-甲基胞嘧啶，6-甲基氨基嘌呤。某种噬菌体DNA的胞嘧啶由5-羟甲基胞嘧啶，胸腺嘧啶由5-羟甲基尿嘧啶代替或含有尿嘧啶。核苷通过3′，5′-磷酸二酯键形成双股链状多核苷酸，用氢键形成双股螺旋结构沃华特生。病毒DNA分子量为 1—200×106，除特殊者例外，一个病毒粒子中含有一个分子的核酸，但也有的噬菌体的核酸成分是环状单链DNA。认为细菌染色体是由一个分子DNA形成的，大肠杆菌 DNA的分子量约为2.5×109。高等动植物细胞核中碱性蛋白质（组蛋白，鱼精蛋白等）与其它相结合，而以脱氧核糖核蛋白的形态而存在。细胞质中特别是线粒体、叶绿体等也有少量DNA存在。高分子量的 DNA在溶液中易被机械的切断，从噬菌体和病毒以外的材料提取的DNA，在多数情况下，一般认为是原来分子的片断。加热或碱处理可使双链间的氢键断开成为单链形态，称此为 DNA变性。定量测定DNA的方法，包括测定磷酸、糖（脱氧核糖）的显色反应（二苯胺反应，半胱氨酸硫酸反应，吲哚反应等），以及由碱基部分紫外吸收（257-270毫微米）的。组织切片中富尔根反应检测法是很有用的。用四种三磷酸脱氧核苷为前体，以亲本DNA为模板，DNA的复制是半保守式的。已知有种种特异性的DNA分解酶，用于DNA结构的研究。