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词条 二苯胺试剂
释义

配制

A液:1.5克二苯胺(C12H11N)溶于100ml冰醋酸(乙酸,C2H4O2)中,再加1.5ml浓硫酸,用棕色瓶保存(光下分解)。如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。

B液:体积分数为0.2%的乙醛溶液(C2H4O)。

将0.1ml B液 加入10ml A液中,制成二苯胺试剂,现配现用。

作用原理

沸水浴中,DNA遇二苯胺会变成蓝色。因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

使用方法

1、配制二苯胺试剂 取0.1mLB液,滴入到10mLA 液中,混匀。

2、鉴定:取4mLDNA提取液放入试管中,加入4mL二苯胺试剂,混匀后观察溶液颜色(不变蓝)。

用沸水浴加热。在加热过程中,随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色)。

3、加热后冷却观察。

加热后冷却观察的原因

DNA在酸性条件下加热,其嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键断裂,生成嘌呤碱、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸,而2-脱氧核糖在酸性环境中加热脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊糖,与二苯胺试剂反应生成蓝色物质。

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更新时间:2025/3/3 17:42:31