词条 | deuterium exchange method |
释义 | 是指离子交换法 一般用于蛋白质结构检测 一般用于测α-螺旋 H/D Exchange Method Pulsed-Amide H/D Exchange Method 1.Pulsed-Amide H/D Exchange Method 蛋白质骨架上面的质子在未被保护的情况下(暴露在溶剂环境中,不受自身其他氧、氮原子中的孤对电子的影响)会与重水中的氘发生质子交换。 >N-H + D2O f >N-H + DOH 蛋白处在开折叠得状态时,发生氕氘交换,之后检测蛋白重新折叠起来的动力学过程。 对于大多数蛋白而言,两端的helices骨架上的60%质子在前20ms的时间内形成折叠,而剩下的40%的质子在接下来的100ms和10s内形成折叠。 具体实验过程: A)在蛋白样品中加入变性剂,使得蛋白处在开折叠的状态下,并且使得蛋白中的全部质子交换成氘pD6.0(时间需要3s以上); B)在上述的样品中加入H2O(pH6.0可以是酸性溶剂),稀释变性剂浓度,使得蛋白样品开始重新折叠。 C)加入H2O碱性溶剂pH 9.0,此时质子交换时间在1ms以内。 D)当蛋白重新折叠完之后,用NMR或者MS检测蛋白结构 |
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