单细胞凝胶电泳分析(singlecellgeleletrophoresis,SCGE)是Ostling等(1984)首创的,以后经Singh等(1988)进一步完善而逐渐发展起来的一种快速检测单细胞DNA损伤的实验方法,因其细胞电泳形状颇似慧星,又称慧星试(cometassay)。Kizilian(1999)改进了一些试验条件,能明显将细胞调亡和细胞坏死的形象与“彗星”区分。MarkS.Rundell等(2003)报道彗星试验测行的损伤主要是由致突变剂引起的。RichardD.Bowden等(2003)研究出了一种新的分析试验结果的彗星尾图谱,可以更加准确的分析彗星的长度及密度。SCGE是评价遗传毒性损害非常敏感的实验,可以检测到每1.657×10-37kg中0.1个DNA的断裂。与经典的染色体畸变、微核、SCE相比,SCGE可以用于活细胞DNA的检测,也能用于死亡细胞DNA的分析,使SCGE不仅可以研究低剂量下的生物效应,也可用于研究高剂量下的生物效应;同时SCGE又可提供DNA修复能力的信息,这使得SCGE非常适用于评价受试物的遗传毒性剂及材料:

1）PBS

2）0.8%正常熔点凝胶（PBS配制）

3）0.6%低熔点凝胶（PBS配制）

4）毛玻璃片

5）盖玻片

6）碱性裂解液（2.5mol/L NaCl;100mmol/L Na2EDTA;10mmol/L Tris;1%肌氨酸钠），临用前加10%DNMSO，1%Triton X-100

7）电泳缓冲液（1mmol/L Na2EDTA;300mmol/L NaOH；Tris-HCl，pH7.5）

8）EB（2ug/ml）

步骤

1.制备第一层胶：100ml 0.8%正常熔点胶，加盖盖玻片，4℃固化10min；

2.制备第二层胶：轻轻地去除盖玻片，在第一层胶上滴加75ul含1×10000个细胞的0.6%低熔点胶（cell与凝胶比例为1：5），加盖盖玻片，4℃固化10min；

3.裂解：去掉盖玻片，将凝胶浸入冰冷的碱性裂解液内（临用前加10% DMSO(二甲基亚砜))，1%Triton X-100），4℃裂解1h；

4.取出玻片，用PBS缓冲液漂洗3次后置于水平电泳槽内，加入pH13的电泳缓冲液（没过玻片2-3min），放置20min（黑闭）。

5.电泳：电压20V，300mA，30min

6.取出玻片，用PBS或Tris-HCl，pH7.5漂洗3次，每次3min；

7.染色：胶上滴加3ulEB，加盖盖玻片，24h检测。或者4℃，潮湿，闭光的条件下保有胶片，观察时再染色，镜检。