定义来源

生物活性成分

生物活性物质

细胞生物活性的化学检测法

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1.生物活性是指能引起细胞正常机理发生改变的能力.在未得到更多的可决定DNA生物活性数值的数据以前,每剂产品中含pg水平的非目的DNA是可接受的”

2.生物活性是指生物材料与活体骨产生化学键合的能力,是衡量生物材料的一个重要指标.1990年Kokubo等川首次报道了能在生物活性玻璃表面促进磷灰石形成的类似于人体血浆的模拟体液(Simu-lationbodyfluid,SBF)

3.所谓生物活性是指FSH与特异性受体结合产生生物学效应的能刀.测定陀H的生物活性,常用岛体小鼠颗粒细胞测定法（GAEJ‘\\该方法的理论基础在于,FSH与颗粒细胞受体结合后,激活芳香酶,诱导产生的E

生物活性成分

诺丽果是一种药用植物，药用植物中所含的生物活性成份剂量与种类，以及这些活性成份的生体利用率，决定了这个药用植物的健康效益。生物活性成份指的是一群化学复合物-就像是维生素和矿物质-能在人体内产生生物效能。诺丽果含有稀有且广泛的生物活性成份，包含iridoids、木酚素、香豆素、多醣类、类黄酮化合物及脂肪酸。

上文中提到的“生物利用率”，就是指一个营养成份在人体的循环系统及细胞中被吸收利用的程度。

1. 一个成份的生物利用率，会受到众多因素-包括其本身的稳定性及溶解度的影响。

2. 当一个成份所具备的生物利用率越稳定，其受到来自于光照、高热、空气、储藏等状况的影响所造成的化合物裂解分解状况将越少。

3. 高溶解度的化合物能透过身体的血液循环系统，快速地被传输，并更快地被细胞吸收利用。

生物活性物质

生物活性物质,是指来自生物体内的对生命现象具体做法有影响的微量或少量物质。如: 有些食物含有多种具有生物活性的化合物，当与机体作用后能引起各种生物效应，称为生物活性物质。它们种类繁多，有糖类、脂类、蛋白质多肽类、甾醇类、生物碱、甙类、挥发油等等。它们主要存在于植物性食物中，对人有的有利，有的有害。瑞士哲人和医生Paracelsus认为，植物是人类食物和药物的来源，也是毒物的来源，“所有食物都是毒物，没有无毒性的食物，仅仅是量的多少左右了他们毒性的大小”。

细胞生物活性的化学检测法

一、四唑盐（MTT）比色法：

检测细胞存活和生长的方法除前面所介绍的方法外，还可用四唑盐比色法试验（MTT）。此法的原理是：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物，并沉积在细胞中，而细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的蓝紫色结晶物，用酶联免疫检测，以在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反应活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。

0.25%胰蛋白酶消化细胞使其成为单细胞，用含0.1%胎牛血清的RPMI培养基配成1x10^9个/L的但细胞悬液，将细胞接种于96孔培养板中，每孔100ul。

将培养板置CO2培养箱中，在37℃、5%CO2条件下，培养3-5天。

培养3-5天后，每孔加入MTT溶液10ul，继续置培养箱孵育3-6h，终止培养，加10%SDS-HCl 100ul/孔，37℃培养数小时，将细胞内与细胞周围的MTT颗粒充分溶解。

用酶联免疫检测仪测定每孔吸光度（OD），选波长490nm。以时间为横轴，OD值为纵轴绘制细胞生长曲线。

用此法测细胞活力，为保证结果的准确性，最好在试验前测定每种细胞的贴比率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，再确定每孔细胞接种数和培养时间，以保证培养终止时不会过满。另外，实验时设空白对照，比色时，以空白孔调零。

二、细胞蛋白质含量测定法（考马斯亮蓝测定法）：

基本原理为：考马斯亮蓝在酸性溶液与蛋白质结合，在595nm波长处呈最大吸收，其OD值与蛋白质含量成正比。主要用于测定妹、受体及细胞外代谢物的特异性活性。

用0.25%胰蛋白酶消化细胞，制成悬液，用含10%胎牛血清的RPMI培养基调整细胞浓度为1×10个/ml，接种24孔培养板，每孔1ml，置37℃、5%CO2条件下培养一段时间。

用胰蛋白酶消化分散，培养板的细胞悬浮在PBS中，细胞计数，取10细胞以1000r/min离心5min，弃上清，加0.5 ml 0.1%SDS或0.3mol/LNaOH，置100℃煮3min，使细胞裂解。

取0.1考马斯亮蓝染液与100ul上述细胞裂解液混匀，放置10min。

用可见光分光光度计在595nm波长处测定溶液的OD值。以溶剂为空白对照，以已知量的牛血清蛋白为标准品，绘制标准曲线。然后根据曲线推算样品中蛋白质含量。

三、细胞蛋白质合成测定法（H-亮氨酸掺入法）：

基本原理为：细胞在合成蛋白质时需要摄取外源性氨基酸，用同位素标记氨基酸如H-亮氨酸可以掺入细胞蛋白合成代谢中，通过测定细胞的放射性强度，可了解细胞蛋白质合成代谢情况。

取对数生长期细胞，用0.25%胰蛋白酶消化，悬浮于含10%胎牛血清的RPMI培养基中，调整细胞密度10-10个/L，接种于24孔培养板，每孔1ml。

将培养板置37℃、5%CO2培养箱中培养至细胞处于对数生长期时，每孔100ul预温37℃的H-亮氨酸。

继续培养4-24h。

终止培养，取出培养板，小心吸取培养上清，用预冷的PBS洗涤，晾干。如果细胞松散，可先用甲醇固定10min。

把培养板放在冰盖上，每孔加1ml 10%三氯醋酸（TCA），在4℃放置10min，吸取上清。

甲醇洗涤、晾干。

每孔加0.5ml 10.3 mol/L NaOH，1%SDS，室温下放置30min。

混匀，移入闪烁液，用液体闪烁计数仪测定每分钟脉冲数（cpm），以cpm/10细胞或cpm/mg蛋白表示。

对悬浮生长的细胞则采用离心法处理。