基本信息

内容简介

图书目录

基本信息

书名:精编蛋白质科学实验指南

ISBN:703018086

作者:John E. Coligan李慎涛等译

出版社:科学出版社

定价:120

页数:0

出版日期:1900-1-1

版次:

开本:

包装:

内容简介

本书是《精编》（Short Protocols）系列的又一个重要分册，是《最新蛋白质科学实验指南》（Current Protocols in Protein Science, CPPS)的精编版本，内容全部取材于该系列和每季度更新的内容，其详细提供了多种实验方案，并包含实验材料、步骤和每种技术的参考文献等信息，可使有经验的研究人员将其作为独立的实验室指南来使用。

本书用大量篇幅介绍了蛋白质制备、检测和分析的传统方法，如蛋白质的提取、表达、纯化和定性分析等，并对最常用的技术，如层析和电泳，进行了详细介绍。蛋白质蛋白质相互作用是蛋白质科学研究的一个热点，本书用两章的篇幅对其鉴定和定量分析的方法进行了介绍；蛋白质组学是蛋白质科学的另一个热点，本书对其方法学和具体操作亦有详细的介绍。此外，生物信息学在现代蛋白质科学研究中发挥着越来越重要的作用，本书对常用的生物信息学分析方法进行了概括，通过生物信息学分析，可以了解蛋白质的基本特性，对研究方案的设计和实验数据的分析处理都具有重要的指导意义。

总之，本书包括了蛋白质科学研究所需的几乎所有的常用技术和最新方法，代表了蛋白质科学研究的当前水平，是一本很好的实验用书。

图书目录

译者的话

前言

参编者

推荐的背景读物

第1章 蛋白质纯化和定性的策略

1.1单元 蛋白质纯化和定性概述

1.2单元 蛋白质纯化流程图

第2章 计算分析

2.1单元 用于蛋白质序列分析的疏水分布图

2.2单元 蛋白质二级结构预测

2.3单元 使用BLAST程序家族进行序列相似性搜索

2.4单元 因特网上的蛋白质数据库

2.5单元 蛋白质三级结构预测

2.6单元 蛋白质三级结构建模

2.7单元 比较蛋白质结构预测

第3章 检测和分析方法

3.1单元 分光光度法确定蛋白质浓度

3.2单元 定量氨基酸分析

3.3单元 肽和蛋白质的体外放射标记

3.4单元 总蛋白质的分析

3.5单元 溶液中和细胞表面上蛋白质的生物素化

3.6单元 用氨基酸进行代谢标记

第4章 提取、稳定和浓缩

4.1单元 用透析和超滤法脱盐、浓缩和更换缓冲液

4.2单元 蛋白质的选择性沉淀

4.3单元 蛋白质的长期保存

第5章 重组蛋白的生产

5.1单元 在大肠杆菌中生产重组蛋白

5.2单元 大肠杆菌表达系统的选择

5.3单元 最适宜于蛋白质生产的大肠杆菌的发酵和生长

5.4单元 在杆状病毒系统中的蛋白质表达

5.5单元 用于生产外源蛋白质的酵母培养

5.6单元 哺乳动物细胞蛋白质表达的概况

5.7单元 在哺乳动物细胞中生产重组蛋白

5.8单元 细胞培养物和痘病毒贮液的制备

5.9单元 重组痘病毒的构建

5.10单元 细胞蛋白质表达系统的选择

5.11单元 使用Gateway系统在多种宿主中进行蛋白质表达

第6章 重组蛋白的纯化

6.1单元 在大肠杆菌中生产的重组蛋白的纯化概述

6.2单元 从大肠杆菌中制备可溶性蛋白质

6.3单元 从大肠杆菌中制备和提取不溶性(包含体)蛋白质

6.4单元 蛋白质折叠概述

6.5单元 大肠杆菌不溶性(包含体)蛋白质的折叠和纯化

6.6单元 GST融合蛋白的表达和纯化

6.7单元 硫氧还蛋白融合蛋白的表达和纯化

第7章 重组蛋白的定性

7.1单元 重组蛋白定性概述

7.2单元 用紫外吸收光谱法测定重组蛋白的一致性和纯度

7.3单元 测定重组蛋白的一致性和结构

7.4单元 横向尿素梯度电泳

7.5单元 分析型超速离心

7.6单元 测定蛋白质的圆二色谱

7.7单元 测定蛋白质的荧光光谱法

7.8单元 用差示扫描量热法测量蛋白质的热稳定性

7.9单元 用HPLC凝胶过滤和质谱法对蛋白质进行定性

第8章 常规层析分离

8.1单元 常规层析概述

8.2单元 离子交换层析

8.3单元 凝胶过滤层析

8.4单元 疏水相互作用层析

8.5单元 肽和蛋白质的HPLC

第9章 亲和层析

9.1单元 凝集素亲和层析

9.2单元 染料亲和层析

9.3单元 天然配体的亲和纯化

9.4单元 金属螯合亲和层析(MCAC)

9.5单元 免疫亲和层析

9.6单元 免疫沉淀

第10章 电泳

10.1单元 蛋白质的单向SDS凝胶电泳

10.2单元 非变性条件的单向凝胶电泳

10.3单元 双向凝胶电泳

10.4单元 利用固定法检测凝胶中的蛋白质

10.5单元 聚丙烯酰胺凝胶电印迹

10.6单元 检测印迹膜上的蛋白质

10.7单元 免疫印迹检测

第11章 化学分析

11.1单元 溶液中蛋白质的酶解

11.2单元 在PVDF膜上酶解蛋白质

11.3单元 测序用蛋白质的胶中消化

11.4单元 溶液中蛋白质的化学切割

11.5单元 膜上蛋白质的化学切割

11.6单元 反相HPLC分离肽

11.7单元 N端序列分析

第12章 翻译后修饰：糖基化

12.1单元 N糖基化的抑制

12.2单元 N连接寡糖的内切糖苷酶和糖胺酶的释放

12.3单元 蛋白质上糖磷脂锚的检测

第13章 翻译后修饰：磷酸化和磷酸酶

13.1单元 用32Pi标记培养细胞及制备用于免疫沉淀的细胞裂解物

13.2单元 磷酸氨基酸的分析

13.3单元 用免疫学技术检测磷酸化

13.4单元 用酶学技术检测磷酸化

13.5单元 用透化处理的策略研究蛋白质的磷酸化

13.6单元 磷酸肽作图及磷酸化位点的鉴定

第14章 翻译后修饰：特定的应用

14.1单元 二硫键形成的分析

14.2单元 蛋白质酰化的分析

14.3单元 蛋白质异戊烯化和羧甲基化的分析

14.4单元 蛋白质氧化修饰的分析

14.5单元 蛋白质泛素化的分析

第15章 蛋白质的化学修饰

15.1单元 半胱氨酸的修饰

15.2单元 氨基的修饰

第16章 质谱

16.1单元 肽和蛋白质质谱分析综述

16.2单元 肽和蛋白质MALDI质量分析用样品的制备

16.3单元 用于MALD-MS指纹图蛋白质的凝胶内消化

16.4单元 在网上搜索序列数据库：用MS-Fit鉴定蛋白质

16.5单元 在网上搜索序列数据库：用MS-Tag鉴定蛋白质

16.6单元 使用纳升喷雾连接装置将样品直接导入电喷雾离子化质谱仪中

16.7单元 使用微型毛细管液相色谱将样品直接导入电喷雾离子化质谱仪中

16.8单元 用四极杆离子阱质谱和SEQUEST数据库匹配鉴定蛋白质

16.9单元 通过手工解释MS/MS谱进行从头肽测序

第17章 肽的制备和处理

17.1单元 在塑料针上合成多种肽

17.2单元 用于生产识别完整蛋白质的抗体的合成肽

17.3单元 作为蛋白质模拟物的肽树枝状高分子的合成和应用

17.4单元 肽二硫键的形成

第18章 蛋白质互相作用的鉴定

18.1单元 蛋白质蛋白质相互作用的分析

18.2单元 用相互作用阱/双杂交系统鉴定相互作用的蛋白质

18.3单元 用基于噬菌体的表达克隆鉴定相互作用的蛋白质

18.4单元 用共沉淀法检测蛋白质蛋白质相互作用

18.5单元 用酵母双杂交芯片高通量筛选蛋白质蛋白质相互作用

18.6单元 用far-Western分析鉴定蛋白质的相互作用

18.7单元 用于研究生物分子相互作用的闪烁邻近分析法(SPA)

第19章 蛋白质相互作用的定量

19.1单元 蛋白质相互作用定量的概述

19.2单元 滴定量热法(titration-calorimetry)

19.3单元 用于测量蛋白质缔合平衡的缩比大区带分析型凝胶过滤层析

19.4单元 带在线式光散射的分子排阻层析

第20章 肽酶

20.1单元 蛋白酶

20.2单元 酿酒酵母蛋白酶体的纯化和定性

20.3单元 真核生物20S蛋白酶体的纯化

20.4单元 丝氨酸蛋白酶抑制剂

20.5单元 用GFP作为报道蛋白分析序列特异性蛋白酶

20.6单元 活性丝氨酸蛋白酶及其变异体的过表达和从大肠杆菌包含体中的纯化

20.7单元 在细胞环境中分析蛋白酶

20.8单元 caspase的表达、纯化和定性

第21章 基于凝胶的蛋白质组分析

21.1单元 使用双向差异凝胶电泳(2DDIGE)确定蛋白质谱

21.2单元 用于蛋白质组分析的激光捕获显微分离技术

附录1 试剂和溶液

附录2 常用的度量制和数据

附录3 常用技术

附录3A 蛋白质折叠剂的使用

附录3B 透析

附录3C 玻璃器具硅烷化

附录3D 使用硫酸铵的蛋白质沉淀

附录3E 琼脂糖凝胶电泳

附录3F 用吸收光谱法进行核酸定量

附录4 试剂和设备供货商

参考文献

索引