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大分子的液相色谱分离和制备 第二版

作者： 师治贤 王俊德 定价： ¥ 25.00 元

出版社： 科学出版社 出版日期： 1999年03月

ISBN： 7-03-005034-7/O.834 开本： 32 开

类别： 分析化学及仪器,生物化学化工,医药农化 页数： 362 页

图书简介

本书较为系统而详细地论述了生物大分子的液相色谱分离和制备。内容包括液相色谱的基本原理和参数，顶替色谱、离子交换色谱、体积排阻色谱、反相色谱、疏水作用色谱、亲合色谱、中低压制备色谱、灌注色谱、蛋白质制备色谱的分离和设计，糖蛋白的分离和纯化及其典型应用。本书既包括了近年来生物大分子的液相色谱分离和制备的发展，也包括了作者在这一领域内的研究成果。

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第二版前言

第一版前言

第一章绪论

1.1生物大分子液相色谱分离和制备的发展动向

1.2分离介质的发展

1.3分离模式的考虑

1.3.1体积排阻色谱

1.3.2离子交换色谱

1.3.3反相色谱

1.3.4疏水作用色谱

1.3.5亲合色谱

1.4分离规模的扩大

第二章液相色谱的基本原理和参数

2.1保留值

2.1.1保留时间(tR)和保留体积(VR)

2.1.2调整保留时间(t′R)和调整保留体积(V′R)

2.1.3容量因子(k′)

2.1.4死时间(t°R)的测定

2.1.5选择性(α′)和相对保留值(α)

2.2柱效率

2.2.1塔板理论的提出

2.2.2塔板数和塔板高度的计算

2.3分离效能总指标K1和分离度R

2.3.1定义

2.3.2K1(或R)与α′(或α)和N之间的关系

2.4谱带扩张

2.4.1柱内谱带扩张

2.4.2柱外谱带扩张

2.5渗透性

第三章高效液相制备色谱的分离选择

3.1制备色谱分离的一般考虑

3.1.1制备色谱运行的模式

3.1.2切割收集技术

3.1.3微量组分的制备

3.1.4实验条件的一般选择

3.2制备色谱模型的讨论

3.3实验条件的选择与产量

3.3.1柱体积与填料

3.3.2流动相

3.3.3样品的溶解度

3.3.4样品量

3.3.5样品纯度的确定

3.3.6最佳制备量

3.4制备色谱仪

3.4.1泵系统

3.4.2检测系统

3.4.3进样系统

3.4.4样品的收集

3.4.5循环系统

3.5中低压液相制备色谱

3.5.1低压液相色谱

3.5.2中压液相色谱

第四章制备柱及相关技术

4.1制备规模

4.1.1在分析柱上的制备

4.1.2小规模的制备

4.1.3大规模的制备

4.2色谱柱和装填技术

4.2.1色谱柱

4.2.2色谱柱的装填技术

4.3径向流动色谱

4.3.1径向流动色谱设计的原理

4.3.2径向流动和轴向流动的比较

4.4灌注色谱

4.4.1灌注色谱概念的提出

4.4.2灌注色谱的基本特征

4.5柱容量及其影响因素

4.6蛋白质定量与纯度标准

4.6.1蛋白质定量

4.6.2蛋白质纯度标准

第五章顶替色谱

5.1顶替色谱的原理

5.2顶替色谱的特性

5.2.1操作线

5.2.2溶质的流速

5.2.3总效率

5.3顶替色谱实验条件

5.3.1顶替剂及其选择

5.3.2流动相的选择及影响

5.3.3填料及其影响

5.3.4柱直径及其影响

5.4溶质?溶质顶替色谱

5.4.1实验设计

5.4.2操作参数

5.4.3多次顶替

第六章体积排阻色谱

6.1体积排阻色谱理论

6.1.1保留模型

6.1.2保留机理

6.2体积排阻色谱理论模型

6.2.1硬球体溶质模型

6.2.2刚性分子溶质模型

6.2.3任意平面孔模型?刚性溶质

6.2.4任意弯曲溶质模型

6.3体积排阻色谱填料

6.3.1有机填料

6.3.2无机填料

6.3.3适合生物大分子分离的填料

6.4体积排阻色谱参数的讨论

6.4.1峰容量

6.4.2聚合物在何积排阻色谱上的分离

6.4.3分子量的准确测定

6.5体积排阻色谱操作条件

6.5.1填料

6.5.2柱长

6.5.3洗脱液

6.5.4流速

6.5.5样品容量

6.5.6蛋白质在变性洗脱条件下的分离

6.6蛋白质在体积排阻色谱上的保留行为

6.6.1蛋白质的分离

6.6.2蛋白质的分子量与容量因子(k′)

6.6.3分配系数(Kd)

6.6.4pH不同时的分配系统与离子强度

6.6.5在一定pH条件下蛋白质的分离度和离子强度

6.6.6离子强度恒定时pH对分配系统的影响

第七章离子交换色谱

7.1填料

7.1.1有机树脂填料

7.1.2无机?有机复合填料

7.1.3表面改性的无机填料及合成方法

7.2参数讨论

7.2.1孔径的影响

7.2.2柱长的影响

7.2.3流速的影响

7.2.4pH的影响

7.2.5离子强度的影响

7.3保留模型

7.4离子交换色谱分离和纯化蛋白质

7.4.1大豆中混合蛋白质的分离和纯化

7.4.2细胞色素C553的分离和纯化

7.4.3β?半乳糖苷酶和磷酸酶的分离和纯化

7.4.4卵清蛋白(OVA)和大豆蛋白(STI)混合物的纯化

7.4.5TGF?α?β半乳糖苷酶的分离

7.4.6肿瘤坏死因子(TNF)的分离

第八章反相液相色谱

8.1溶质保留机理与收敛性

8.1.1保留机理

8.1.2保留值收敛性

8.2填料及一般合成方法

8.2.1填料概述

8.2.2填料合成的一般方法

8.3分离和制备色谱的选择

8.3.1柱容量与分离度

8.3.2色谱柱的柱效率与蛋白质的分离度

8.3.3流动相的选择

8.3.4柱温的影响

8.3.5流速的影响

8.4蛋白质在柱上的回收主

8.4.1上柱量与回收率的关系

8.4.2洗脱系统与回收率的关系

第九章离效疏水作用色谱

9.1离效流水作用色谱的原理

9.2高效疏水作用色谱填料

9.2.1基质

9.2.2配基

9.3实验条件

9.3.1盐的影响

9.3.2离子强度的影响

9.3.3pH值的影响

9.3.4柱温的影响

9.4疏水作用色谱与反相色谱的区别

第十章亲合色谱

10.1亲合色谱的概念及其理论模型

10.1.1概念

10.1.2解离常数和分配系数

10.2亲合色谱的基质及控制因素

10.2.1理想基质的性质

10.2.2基质的控制因素

10.2.3具有实用价值的基质

10.3亲合色谱填料的合成

10.3.1配位体的选择

10.3.2基质的活化和功能化

10.3.3间隔臂分子

10.3.4间隔分子与配位体偶联

10.4亲合色谱的洗脱

10.4.1平衡和平衡缓冲液

10.4.2蛋白质的浓度和温度效应

10.4.3流速和样品体积

10.4.4洗脱方法

10.5蛋白质及其它生物大分子的分离和纯化

10.5.1纯化调节细胞功能的大分子和复杂的生物结构

10.5.2亲合色谱在分析化学中的应用

第十一章蛋白质的制备色谱设计

11.1蛋白质分析色谱和蛋白质制备色谱

11.2吸附?解附的理论

11.2.1疏水作用色谱中的吸附/解附

11.2.2亲合色谱中的吸附/解附

11.3制备规模的扩大

11.3.1样品的来源

11.3.2循环系统

11.3.3色谱柱超载

11.3.4柱体积的增大

11.3.5蛋白质的产量与产率

11.4混合蛋白质在反相色谱上的制备

11.4.1实验方法运行设计

11.4.2实验条件

第十二章高效液相色谱的应用

12.1核苷和核苷酸的分离

12.1.1pH对保留行为的影响

12.1.2流速对核苷分离的影响

12.1.3甲醇含量的变化对容量因子k′的影响

12.1.4核苷和核苷酸的分离

12.2糖蛋白的分离和纯化

12.2.1基因重组人体白细胞IL?2的分离和纯化

12.2.2立体排阻色谱纯化膜糖蛋白抗原

12.2.3亲合色谱分离纯化多糖人体免疫球蛋白的亚类

12.2.4基因重组人体白细胞干扰素的反相色谱分离和纯化

12.3灌注快速蛋白质色谱

12.3.1灌注反相色谱分离血管扩张素异构体

12.3.2灌注离子交换色谱快速分离蛋白质

12.3.3灌注疏水作用色谱快速分离免疫球蛋白

12.3.4灌注免疫生物金属络合物亲合色谱

12.3.5灌注生物特异性的亲合色谱

12.4单克隆抗体的分离和纯化

12.4.1分析分离系统

12.4.2分离纯化系统

12.4.3腹水和组织培养中单克隆抗体的分离和纯化

12.5人体血清中脱脂蛋白质的分离和纯化

12.5.1样品的制备

12.5.2色谱分离纯化系统

12.6α?淀粉酶的分离和纯经

12.6.1亲合色谱分离纯化α?淀粉酶

12.6.2疏水作用色谱分离纯化α?淀粉酶

12.6.3离子交换色谱快速纯化α?淀粉酶

第十三章生物样品的制备

13.1材料选择及预处理

13.2细胞的破碎

13.2.1物理化

13.2.2生物化学法

13.2.3化学处理法

13.3提取

13.3.1蛋白质和酶的提取

13.3.2核酸的提取

13.4蛋白质和酶的初步提纯

13.4.1核酸沉淀法

13.4.2蛋白质沉淀法

13.4.3改变pH值

13.4.4选择变性法

13.4.5盐析法

13.5核酸的水解

13.6生物多糖的分离提取

附录一国外常用的适于生物大分子分离分析的高效液相色谱填料

表1高效体积排阻色谱(SEC)填料

表2反相色谱(RPC)填料(大孔)

表3疏水作用色谱(HIC)填料

表4离子交换色谱(IEC)填料

表5亲合色谱(AFC)填料

1.亲合色谱常用的底物(基体)

2.一些代表性的亲合色谱填料举例

附录二典型蛋白质性质

表1一些蛋白质的分子量

表2几种蛋白质的等电点

表3不同类型的蛋白质的溶解度