原理

亲和层析特点

与亲和层析比较

原理

亲和超滤是将连有特异性配基的载体与目标蛋白粗提液混合, 特异性地与溶液中的目标物给合,形成体积及分子量远大于杂蛋白的复合物。超滤时,复合物被滤膜截留,而杂质则透过膜被除去,然后,用合适的洗脱剂将结合的目的物洗脱下来, 再通过超滤,该目标物透过膜而得到分离纯化的产品,亲和载体则被截留循环使用。

亲和层析特点

（1）简单,快速,

（2）回收率和纯化倍数高

（3）配基对相对应的蛋白质一般有稳定作用

（4）亲和性吸附剂可反复使用。

（5）层析柱中流动状况复杂,凝胶颗粒内传

质阻力大,达到吸附平衡的时间长

（6）亲水性载体的机械强度低，放大困难,处理量小

与亲和层析比较

a.吸附：

亲和超滤：在全混搅拌, 大体积，稀物料，吸附容量大。

亲和层析：小部分目标物与亲和载体在顶部接触。多孔性载体反应速度慢,达平衡时间长。优点是相当于多个理论塔板数，用于被纯化产物浓度高,体积小时

b.冲洗:

亲和超滤：要求更大的冲洗体积,可在较短的时间内完成冲洗操作。其缺点是冲洗期间产物损失较大。

亲和层析：在淋洗阶段需要较长的时间,但所需淋洗缓冲液体积较少。

c.洗脱:

亲和超滤:亲和超滤易于大体积快速操作, 产物浓度稀,需增加超滤单元用于浓缩.

亲和层析: 洗脱与再生速度取决于柱结构与流动状况，需要较长时间