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词条 核酸杂交技术
释义

核酸杂交技术是一种分子生物学的标准技术,用于检测DNA或RNA分子的特定序列(靶序列)。DNA或RNA先转移并固定到硝酸纤维素或尼农膜上,与其互补的单链DNA或RNA探针用放射性或非放射性标记。在膜上杂交时,探针通过氢键与其互补的靶序列结合,洗去未结合的游离探针后,经放射自显影或显色反应检测特异结合的探针。

DNA印迹杂交(Southern blot)RNA印迹杂交(Northern blot)

1、DNA印迹杂交(DNA blot hybridization)有两种核酸印迹法:

·将DNA或RNA溶液直接点样于硝酸纤维素膜或尼农膜上(斑点或狭线印迹)

·经琼脂糖凝胶电泳将片段的DNA或RNA转移到膜上(Southern和Northern印迹法)。DNA在电泳前先用限制性内切酶消化。

2、RNA印迹杂交(RNA blot hybridization):

·RNA印迹杂交是一种检测已固定在滤膜上的总RNA或mRNA特定靶序列的技术。

(一)斑点杂交

将少量核酸样品点样在硝酸纤维素滤膜上,80℃烘烤后可牢固地固定在膜上,再用探针进行杂交。尼龙膜,特别是聚偏氟乙烯(PVDF)与DNA结合力更高,坚韧、易操作。点样可手工,也可用手工点样品。检测可用放射性探针自显影或非放射性探针显色。可用于DNA或RNA分析。

(二)原位杂交

在保持细胞形态条件下,进行细胞内杂交,显影或显色。可用于DNA或RNA分析。荧光原位杂交(FISH)进行染色体DNA分析可用于生物学研究的许多领域以及临床细胞遗传学研究。其主要优点是不仅可以在细胞分裂的中期,而且可在分裂间期核中诊断染色体的变化。

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更新时间:2025/3/3 18:24:37