| 词条 | 催乳素酶联免疫试剂盒 |
| 释义 | 百科名片催乳素（prolactin，PRL）为腺垂体分泌的一种蛋白质激素，由199个氨基酸残基所组成。其对乳腺与泌乳的作用主要为促进乳腺发育生长，引起并维持泌乳。 采用原理 竞争酶联免疫分析法定量检测牛奶和奶牛血清、血浆中的催乳素(Prolactin)。 简介泌乳素由垂体前叶分泌，是单链多肽激素，分子量近24,000。泌乳激素的释放与合成通过催乳激素释放和抑制因素，受神经内分泌的控制。女性催乳激素水平一般高于男性。其主要功能是促进乳房发育，维持乳汁分泌。怀孕期间，催乳激素水平增长到正常值的10到20 倍，产后3-4 周降到未孕水平。哺乳期母亲催乳激素保持高水平，几个月后血清浓度恢复到未孕水平。 应用ResidueTestProlactin ELISA kit 催乳素酶联免疫试剂盒运用竞争抑制酶标免疫分析法定量测定牛奶中崔乳品含量。试剂盒中包含96次检测所需酶联免疫试验试剂，包括标准溶液。检测时间为45分钟，检测限为0.35ng/mL（ppb）。试剂盒回收率高于80%。 实验原理ResidueTestProlactin ELISA kit 催乳素酶联免疫试剂盒测定的基础是双抗体夹心法，微孔板包被有针对催乳素的抗体，加入催乳素标准或样品溶液，标准或样品溶液中的催乳素作为抗原与抗体结合形成固相复合物，加入催乳素酶标记物，与固相复合物结合，没有结合的酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶基质/发色剂加入到孔中，结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色由蓝色转变为黄色。在450nm测量，吸光强度与样品中的浓度成正比。 试剂盒提供的试剂每一个盒中的试剂足够进行96个试验（包括标准测定），盒中的材料如下： 1×96孔板（12条×8孔，可以拆分为单孔）包被有捕获抗体。 6×标准溶液（1ml/瓶），冻干粉 0ppb(0标准),，5 ppb，20ppb，50 ppb，100 ppb，200ppb， 1×酶标记物（11ml）,直接应用液 1×基质/发色剂（14ml），直接应用液 1×反应终止液（14ml），直接应用液，包含有0.5M硫酸 1×洗涤缓冲液（30ml，40×浓缩） 需要准备的设备及试剂450nm滤光片的酶标仪 单道和多道微量加液器及吸头 蒸馏水或去离子水 吸水纸 储存条件 保存试剂盒于2 - 8°C，不要冷冻。 将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封。 无色的发色剂对光敏感，因此要避光保存。 不要使用超过有效期的试剂盒。 不要交叉使用不同批号的试剂盒 样品处理 牛奶样品： 牛奶样品需去除脂肪干扰，可30,000g以上离心力冷冻离心（2-8℃）30分钟，除去脂肪层后检测。 奶粉样品需用双蒸水10倍稀释，30,000g以上离心力冷冻离心（2-8℃）30分钟，除去脂肪层后检测。 牛血清、牛血浆样品： 采血后，室温离心分离血清；血浆抗凝剂为EDTA、肝磷脂、枸缘酸钠。 血清、血浆样本在2-8 °C保质48小时。更长时间放-20°C冷冻。解冻的样本实验前应倒置几次。 含叠氮纳化物不能用于酶反应。 检测步骤1.试剂准备使用之前将所有试剂回升至室温(20- 25°C, 68 - 77°F)。 标准溶液： 用双蒸水1 ml对标准品复溶，复溶后2- 8°C可保存两个月，- 20°C可保存更长时间。 洗涤缓冲液稀释： 用双蒸水40倍稀释浓洗涤缓冲液，如30ml浓缩洗涤缓冲液，1170ml双蒸水，稀释后的洗涤缓冲液室温可保存两周。 2.测定程序每次检测都必须做标准曲线，根据试剂盒推荐的洗板步骤进行操作，试验过程中不要让板孔干燥。 1.将足够标准和样品所用数量的孔条插入微孔架，并记录标准及样品的位置。 2.加入25μl的标准或处理好的样品到各自的微孔中，每个标准和样品应当做平行。 3.加入100μl稀释的酶标记物到微孔底部，用手轻轻摇动微孔板混合，在室温（20- 25°C, 68 - 77°F）下孵育30分钟。 4.倒出孔中的液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打（拍打三次）以完全除去孔中的液体，用洗瓶或多通道移液器向孔中充满250μl稀释后的洗涤缓冲液，轻轻拍打微孔板四周，倒出孔中的液体，完全除去孔中的液体，再重复操作洗涤步骤两次以上。 5.加入100μl基质/发色试剂到微孔中，用手轻轻摇动微孔板混合，在室温（20- 25°C, 68 - 77°F）下暗处孵育10分钟。 6.加入50μl反应终止液到微孔中，用手轻轻摇动微孔板混合，在450nm处测量吸光度值以空气为空白，必须在加入终止液后10分钟内读取光度值。 结果计算： 计算标准、质控品和样本的平均OD值。建立标准曲线，使用每一个标准品的OD值与其相对应的浓度值描点作图。OD 值为纵轴（Y轴），浓度为横轴（X 轴）。样品的催乳素浓度，首先在Y轴上查找OD 值，横向延伸至标准曲线，以标准曲线上的点拉垂直线与X轴相交，得出催乳素的浓度值。计算公式：4参数或Logit-Log。 特异性Compound % Cross reactivity hCG 0 TSHl 0 LH 0 FSH 0 hGH 2.5 检测限测试20个阴性样品的平均值加2倍标准差，0.35ng/ml (ppb) |
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