词条 | HAT选择法 |
释义 | HAT选择法即胸苷激酶基因选择法,胸苷激酶(Thymidine Kinase,简称TK)能催化胸苷(T)转变成dTMP,进而生成dTTP。TK选择系统将含有tk+基因的表达载体导入tk-宿主细胞,再用含有次黄嘌呤(H),氨基喋呤(A)和胸苷(T)的培养基培养细胞,其中A为叶酸类似物,可阻断dATP,dGTP的合成,及dUMP到dTTP的转化,但H可合成IMP,再由IMP合成dATP和dGTP,含有载体的tk+细胞能利用T合成dTTP,故可合成DNA使细胞存活,不含载体的tk-细胞不能利用T合成dTTP,无法合成DNA使细胞死亡。该系统中的tk+基因能报告载体的导入,称报告基因,培养基中含有H,A和T,故将这种选择方法称做HAT选择法。 |
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