往已有众多的特定蛋白标准，为何还要有CRM－470？

1． 自1967年起世界上已经公布了20余种血浆蛋白国际参考标准。包括：IgG、A、M、D、E，白蛋白、铜蓝蛋白、转铁蛋白、巨球蛋白、铁蛋白、微球蛋白、C－反应蛋白，补体C、C、C、C、因子B等。

2． 以往标准标示以人为指定的“国际单位（IU〕”表示，而且每个标准品复溶后造成体积差异，使用不便。这些和当前以表示的计量单位不具有可比性。

3． 以往标准标定方法仅使用放射免疫扩散技术（RID），方法技术要求不严格。不适用于现有免疫比浊技术。

4． 同一特定蛋白的不同批参考标准间有明显差异。

5． 各个标准只包含为数不多的特定蛋白参考标准，尚无一个较完整的多种蛋白标准。

6． 在实际应用中，以往的国际标准不能解决特定蛋白免疫监测结果之间的可比性问题。

新的国际标准CRM－470的制备和定值要点是什么？

1． 血浆蛋白测定国际标准化目标是使一个样品在全世界得到一个相同的结果。为此要建立新的国际第二级具血清基体的参考品，用作14种血浆蛋白监测的参考，以后将有更多蛋白被定值。

2． 1989年国际临床化学学会（IFCC）会同美国病理学会（CAP），指定由Behling公司负责制备国际参考品。

3． 收集来自法国、德国、瑞典、瑞士、英国的364名供血者血液。

要求：

1〕 血液中无类风湿因子或单克隆组分；无黄疸、脂血、溶血；Hbsag,抗HIV，HTLVI，抗HCV及梅毒血清试验均阴性。

2〕 血清需及时分离冰冻，送Behling公司，经融化，去脂，加防腐剂，加纯化CRP，加缓冲液，混匀除菌滤，最后分装。

4． 按照IFCC定值方案，统一使用指定的各特定蛋白纯化标准为原始标准。避免各实验室因使用的标准不一致造成定值差异。方案详细规定了定值的操作程序以及统计方法。例如为确保在监测时各标准、样品间无基体效应的差异和没有抗原过剩，要求回归线通过零点；标准和测定都须作多个稀释（须以重量法校正），每个稀释样品作双份检测等。使27个定值实验室（欧洲、美国、日本）步调一致，在规定期限内完成定值。

允许的测定方法为：免疫透射比浊，免疫散射比浊，放射免疫扩散。

5． 本参考品涉及14种特定蛋白，参见表2中所列各种蛋白。

6． 1992年欧洲经济共同体的共同体参考局（Bureau Communitaire de Reference BCR）认可该参考品，并给予代号CRM－470（认可参考品470）。

怎样正确使用CRM－470作准确度传递？

IFCC强调：

1． 为使CRM－470可以使用较长时期，CRM－470只提供给生产厂商，不直接用于一般实验室。

2． CRM－470是以血清为基体的参考品，它只用于以血清为材料的商品化校准品的校准。

3． 在进行数值传递（即厂商定值）时，实验方案须和CRM－470定值方案一致。包括：两个互相比较的材料作多次稀释的测定；对样品作多批双份测定；用相应的统计方法等。

CRM－470对标准化有了哪些作用？

1． 表1中列出的厂商都已签署认可CRM－470作为他们公司的第一标准，推动了这些公司用户结果的可比性。

2． 对同一组白种成年人血清作参考值检测，用上述公司产品得到的结果极其一致，说明特定蛋白检测的质量有了显著提高。结果见表2。

3． 以往没有儿童的参考范围。现在使用CRM－470为第一标准的厂商产品系列，又得到了儿童的特定蛋白参考范围（见表3）。

4． 对尿液和脑脊液中这些蛋白的检测质量也有了明显改善。

5． 近年来，其它非签署公司要对自己的校准品定值时，已经形成采用上述公司的特定蛋白检测系列（仪器、世纪、校准品），按照数值传递实验方案（程序），对本公司校准品定值。然后再以病人样品和认可的上述公司检测系列作方法学比较，确认传递的可靠性，再将产品系列推向市场。

如何认识特定蛋白检测的质量控制？

1． 现有免疫比浊测定的质量三因素：抗原、抗体、基体。

2． 确认样品中被检抗原和校准品中抗原的一致性。

3． 制备试剂中抗体时使用的抗原和样品中抗原的一致性。

4． 试剂坚持使用多克隆抗体。抗体的纯度、每批抗血清内各单克隆抗体的组成及相对比例保持恒定。

5． 抗原抗体反应时所处的基体状况保持恒定和一致。

6． 正确的数据处理技术。

7． 校准品稳定性、不混浊。

8． 抗原过剩的识别。

表1 同意上述参考范围的厂商

Abion

Dako Diagnostica

Abbott

DADE Diagnostika

Bayer Diagnostics

Dupont

Bechman Instruments

Hoffmann-La Roche

Becton Dickinson

Human Gesellschaft Fur Biochemica

Behringwerke

Johnson & Johnson Clinical Diagnostics

Biokit

Merck Diagnostik

Bio Mereux

Orion Diagnostica

The Binding Site

Sanofi Diagnostics Pasteur

Boehringer Mannhein

Wako Chemicals

表2 血清中14种蛋白，以CRM－470校准的白种成年人参考范围

血清中蛋白

参考范围（g/L）

白蛋白

35～52

a1抗凝蛋白酶

0.9～2.0

C3补体

0.9～1.8

C4补体

0.1～0.4

铜蓝补体

0.2～0.6

C反应蛋白

<0.005

a1酸性糖蛋白

0.5～1.2

触珠蛋白

0.3～2.0

IgA

0.7～4.0

IgG

7～16

IgM

0.4～2.3

a1巨球蛋白

1.3～3.0

前白蛋白

0.2～0.4

转铁蛋白

2.0～3.6

表3 以CRM－470为校准品儿童的参考范围

白蛋白

< 1岁

≥1岁

35～52

a1抗凝蛋白酶

3岁

≥3岁

0.9～2.0

C3补体

≤3个月

4～6个月

> 6个月

0.9～1.8

C4补体

≤3个月

4～6个月

> 6个月

0.1～0.4

铜蓝补体

0～5

≥1岁

0.2～0.6

前白蛋白

0～4天

> 6岁

0.2～0.4

转铁蛋白

0～7天

> 1岁

2.0～3.6

IgA

新生儿

1～3个月

4～6个月

7～12个月

2岁

3～5岁

6～9岁

10～13岁

未检出

0.05~0.5

0.08~0.8

0.3~1.4

0.3~1.2

0.4~1.8

0.6~2.2

0.7~2.3

IgG

新生儿

1～3个月

4～6个月

7～12个月

2岁

3～5岁

6～9岁

10～13岁

7.0~16

2.5~7.5

1.8~8.0

3.0~10

3.5~10

5.0~13

6.0~13

7.0~14

IgM

新生儿

1～3个月

4～6个月

7～12个月

2岁

3～5岁

6～9岁

10～13岁

0.1~0.3

0.1~0.7

0.2~1.0

0.3~1.0

0.4~1.4

0.4~1.8

0.4~1.6

0.4~1.5