培养方法

一、翻转干涸法

1、将组织剪成1mm3左右的组织块

2、用PBS缓冲液清洗组织块3次

3、将组织块按照一定间距转入培养瓶内

4、轻轻将培养瓶翻转过来，将适量培养液加到非细胞生长面上，注意翻瓶时勿令组织小块流动，塞好瓶塞置36.5℃温箱培养2小时左右（勿超过4小时），使小块微干涸

5、从微箱中取出培养瓶，开塞，46度斜持培养瓶，箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块置温箱中静止培养

6、待细胞从组织块游出量增后，再补加培养液

二、薄层培养法

1、将组织剪成1mm3左右的组织块

2、用PBS缓冲液清洗组织块3次

3、将组织块按照一定间距转入培养瓶内4、静置30分钟（使组织块更好的贴壁）

5、每瓶加入2.0mL新鲜培养液（缓慢，防止组织块浮起），塞好瓶塞置37oC恒温培养箱内培养

6、根据培养液的颜色变化，更换培养液（每天进行细胞形态观测，细胞计数，测上清液PH值）