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词条 热解糖梭菌
释义

热解糖梭菌(Clostridium thermosaccharolyticum)属芽孢杆菌科梭菌属群Ⅲ的一个种,为革兰染色阳性梭菌,专性厌氧,大小为0.5μm×3~5.5μm,孢子卵圆形,端生,最适生长温度为55℃,37~45℃微弱生长,故也叫嗜热厌氧菌,广泛存在于自然界中,能引起罐头产品如带番茄酱的意大利面条、甜土豆恶、南瓜、绿豆以及芦笋的酸败。

一般检查

1.外观检查 软包装蘑菇罐头,外观膨胀、呈气囊状。为滨州市某食品加工厂生产,批号为20011206。

2.内容物检查 无菌操作,用无菌剪子将膨胀罐头打开,有大量气体溢出,再用灭菌镊子取内容物约20g,移入无菌容器内,待细菌检验。变质罐头蘑菇块较正常罐头色泽暗,酷酸臭味,汤汁混浊,pH为4.5。正常蘑菇罐头37℃保温10d,打开,色泽正常,无异味,汤汁较清,pH为6.8。

3. 涂片染色镜检 取变质罐头内容物汤汁部分,直接涂片,固定后革兰染色,镜检见革兰阳性梭状芽孢杆菌,再取正常罐头汤汁部分涂片、固定后革兰染色,镜检未见细菌繁殖。

细菌分离与鉴定

商业无菌检验 取变质罐头内容物与正常罐头37℃保温10d后内容物,分别接种庖内培养基,37℃观察5d,庖内培养基55℃厌氧观察3d,溴甲酚紫葡萄糖内汤(带倒管),37℃观察5d,溴甲酚紫葡萄糖肉汤(带倒管)55℃观察3d。结果除变质罐头内容物在庖内培养基内55℃厌氧培养3d产酸产气外,其余接种管均未见细菌生长。阳性管涂片染色见革兰阳性梭状芽孢杆菌,菌体大小为0.5μm×3~5μm,芽孢位于菌体末端并且膨大。观查动力,运动不活泼。

热解糖梭菌的检验

1.增菌 取变质罐头内容物2g分别热接种PE-2培养基和改良PE-2培养基(绿豆代替豌豆),加蜡,速冷,置55℃厌氧培养72h,结果培养管内液体均混浊,变黄色且产气。两种培养基内变化无差别。

2.分离取增菌液分别接种PE-2琼脂培养基与改良PE-2琼脂培养基,55℃厌氧培养48h,菌落均为灰白色,偏平,边缘不整齐,表面有光泽,中心稍凸,直径1~2mm,涂片染色为革兰阳性端生芽胞梭菌。两种培养基上菌落特性相同。

3.生化反应取分离菌种分别接种到0.5%糖类培养基及其它生化培养基,55℃厌氧培养72h。结果显示,该菌能分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露糖、蔗糖、半乳糖、果糖、木胶糖、阿拉伯糖、棉子糖、纤维二糖、水杨苷、淀粉产酸并产气,不能分解蛋白质、甘露醇、山梨醇、卫矛醇、肌醇、甘油、尿素,卵磷脂酶、硫化氢、硝酸盐还原、明胶液化呈阴性反应,在2%NaCI、4%NaCI中不能生长,在10%葡萄糖中能生长,但不能在15%葡萄糖中生长。

4.在不同pH环境中生长情况 取分离菌种分别接种不同pH的PE-2培养液与改良PE-2培养液,55℃厌氧培养72h,结果其生长范围为pH4.0~8.5,最佳生长pH为6.0~7.0。与文献报道相同。

5.在不同温度条件下生长情况 取分离菌种分别接种PE-2培养液和改良PE-2培养液,放不同温度下厌氧培养观察7d,结果37℃以下不生长,37~45℃微弱生长,55~60℃生长最好。

6.在不同培养基内的生长情况 将菌种分别接种于几种不同的培养基。55℃厌氧培养72h,结果在含水量0.1%硫乙醇酸钠的卵黄琼酯、改良PE-2琼脂、亚硫酸钠葡萄糖琼脂、庖肉培养基、PYG培养液中生长良好, 但在亚硫酸钠琼脂内不生长。

7.动物实验选体重为1.5kg健康兔子2只,取该菌72h培养液(55℃厌氧)给予灌胃,每只20ml,观察7d,未见不良反应。将培养液离心,取上清液进行小白鼠(18~20g)腹腔注射,每只0.5ml,共4只,观察7d未见异常反应。

讨论

1.实验表明,从酸败变质的软包装蘑菇罐头中分离出1株嗜热厌氧性芽孢梭菌,经对其形态、培养特性、生理生化、毒理等特性的实验,结果与Bregey手册(第8版)关于热解糖酸菌的描述相符。证明了由该菌引起上述软包装蘑菇罐头发生产气性变质。

实验中,对PE-2培养基进行了改进,用绿豆代替PE-2培养基中的豌豆,其它成分不变,结果生长良好,检出菌在2种培养基上生长无差别。

2.产气性变质通常是指罐听发生膨胀的变质而言,这种变质系由专性嗜热的产芽孢厌氧菌—嗜热解糖梭菌所引起。实验显示,该菌是专性厌氧菌,最适生长温度为55℃。其分解糖的能力很强,能分解葡萄糖、乳糖、蔗糖、水杨苷及淀粉等多种糖类而产酸和大量气体,不分解蛋白质、不能使硝酸盐还原、不产生毒素,也不能引起感染。但是它具有酸败性,如芽孢先在较高温度(50~55℃)下发芽,则37℃14d就可产生酸败,使内容物常常带有酪酸臭味或干酪样臭味。其最适pH是6.0~7.0,有时能在pH为4.1到4.5的番茄产品中发生酸败,而低于pH4.0以下的罐头食品的酸败与嗜热厌氧菌是无关的。

3.商业无菌检验是1990年卫生部批准实施的罐头食品检验方法。目前,国际上许多国家都采用此法,我国现已将其列为国家标准,但时间较短,还存在一些问题有待推广与提高。在商业无菌罐头中可能存在耐高温的无毒的嗜热芽孢杆菌,如热解糖梭菌,按国标方法中商业无菌检验要求,只有预定要输往热带地区(40℃以上)的低酸性罐头食品才进行55℃保温试验,而37℃保温试验不容易检出该菌,因而,若罐头中残留该菌尚未引起膨胀变质时,常检验为合格,但因罐头加工过程中冷热不及时,使残留芽孢在较高温度(50~55℃)下发芽,即使在非热带地区(40℃以下)仍然会慢慢引起罐头酸败变质。此外,存放罐头食品如与热源靠得太近,使部分罐头食品受热,也可造成发生食品酸败。因此,建议输往非热带地区的罐头食品也应进行55℃保温试验。以杜绝由热解糖酸菌引起的罐头变质。

4.热解糖梭菌广泛分布于外界环境中,可通过水体、土壤,农副产品等污染罐头食品,已经发现辅料如糖、奶粉、淀粉、谷类以及营养糊是嗜热厌氧菌的主要来源。国外报道在生原料如蘑菇和洋葱的产品中曾发现该菌。在罐头加工过程中,若杀菌不彻底,再加上加工后不能立即冷却,产品温度较长时间保持在45~65℃之间,残留的芽孢即可发芽、生长繁殖。尤其罐头中多含有淀粉等含糖辅料,造成罐头食品发生酸败变质。所以,在罐头加工过程中应严格进行杀菌,杀菌后切忌堆放,应立即通风冷却,将罐头中心温度立即有效地冷却到43℃以下, 并将罐头远离热源在低于35℃的地方储存,这样嗜热厌氧菌的存在就不重要了,从而保证达到商业无菌,减少罐头食品变质,避免经济损失。

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更新时间:2024/12/23 23:52:18