染色体步行（chromosome walking）是指由生物基因组或基因组文库中的已知序列出发逐步探知其旁邻的未知序列或与已知序列呈线性关系的目的序列的核苷酸 染色体步行是一种常用的克隆已知基因旁侧序列的技术。现有的染色体步行PCR技术包括反向PCR、锅柄PCR、连接介导PCR、热不对称PCR、SON PCR等,并在此基础上提出了一种新的染色体步行PCR技术的构思.它能运用特异引物与随机引物的搭配。