Star活性简介

引起Star活性的原因

抑制Star活性的方法

Star活性简介

限制酶在一些特定条件下使用时，对于底物DNA的特异性可能降低。即可以把与原来识别的特定的DNA序列不同的碱基序列切断，这个现象叫Star活性。Star活性出现的频率，根据酶、底物DNA、反应条件的不同而不同。

导致Star活性出现的因素包括：低粒子强度、高pH值以及过高的甘油浓度(> 5% v/v）。尤其是最后一点，因为一般限制酶生产商提供的缓冲液（buffer）都含有较高的甘油浓度（典型为50% v/v），如果稀释不充分就有可能导致Star活性的出现。当有一个以上酶切位点时，该问题显得更加突出。

引起Star活性的原因

1. 较高的甘油浓度 (>5% v/v)。

2. 酶与底物DNA比例过高 (不同的酶情况不同，通常为>100 U/μg)。

3. 低盐浓度 (<25 mM)。

4. 高pH值 (pH>8.0)。

5. 存在有机溶剂 (如DMSO、乙醇、乙烯乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺等)。

6. 用其他二价离子替代镁离子 (如Mn，Cu，Co，Zn等)。 Star活性是内切酶的一种普遍现象，但是大多数可以控制，正常情况下使用提供的缓冲液就不会出现Star活性。

抑制Star活性的方法

1. 尽量使用较少的酶进行完全消化反应。这样可以避免过度消化以及过高的甘油浓度。

2. 尽量避免有机溶剂 (如制备DNA时引入的乙醇)的污染。

3. 将离子浓度提高到100～150 mM (若酶活性不受离子强度影响)。

4. 将反应缓冲液的pH值降到7.0。

5. 二价离子使用Mg。