Rnase介绍(定义 RNase H RNase A L19RNA)

RNase的灭活和制备(RNase的灭活 RNase的制备)

Rnase介绍

定义

Rnase，即RNA（水解酶），包括几种，RNase A和RNase H

RNase H

是一种核糖核酸内切酶，它能够特异性地水解杂交到DNA链上的RNA磷酸二酯键，故能分解RNA/DNA杂交体系中的RNA链。该酶不能消化单链或双链DNA。

RNase A

是一种被详细研究和具有广泛应用的核酸内切酶。RNase A 对RNA有水解作用，但对DNA则不起作用。RNase A在C端和U端残基处专一地催化RNA的核糖部分3'-与5' -磷酸二酯键的裂开，形成具有 2',3'-环磷酸衍生物寡聚核苷酸。如 pG-pG-pC-pA-pG 被切割产生pG-pG-pCp 和 A-pG。可以用来去除DNA制品中的污染RNA。 它们的合成目前资料还比较少。

L19RNA

具有磷酸二酯酶、酸性磷酸酶、磷酸转移酶、核苷酸转移酶和RNA限制性内切酶等五种水解酶活性，不过它们的底物都是RNA。因此Ll9 RNA既有RNA水解酶(RNase)的作用，又有RNA聚合酶(polymerase)的作用。

RNase的灭活和制备

RNase的灭活

RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后又迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能使RNase完全失活。它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。一般情况下采用用DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。玻璃制品则一般是在140度烘箱烘烤3个小时。

RNase的制备

动物器官中含有丰富的RNase，特别是胰脏中含量更丰富。商品化的RNase大部分都是通过从牛胰脏中获得的，但目前国产的RNase活性都很低一般只有60U/mg，而Sigma公司的能达到60KU/mg，广州捷倍斯生物公司的也能达到50KU/mg，是国产活性比较高的。