1.简介(“基因靶向”技术，通常被称作基因敲除。 事例)

2.基因敲除的实验步骤((1)构建重组基因载体： (2)用电穿孔、显微注射等方法 (3)三同源重组： (4)筛选： (5)表现型研究研究：)

3.RNAi引起的基因敲除

4.近年

1.简介

“基因靶向”技术，通常被称作基因敲除。

是指对一个结构已知但功能未知的基因，从分子水平上设计实验，将该基因去除，或用其他相近基因取代，然后从整体上观察实验动物，推测相应基因的功能。

事例

“基因靶向”技术利用胚胎干细胞改造老鼠体内的特定基因。在“基因靶向”技术的帮助下，科学家可以使实验鼠体内的一些“不活跃”基因失去作用，从而发现这些基因的实际功能。科学家希望借此发现人类一些疑难杂症在分子水平上的发病原因，并最终找到治疗途径。目前，“基因靶向”已被应用于对囊肿性纤维化、心脏病、糖尿病、阿尔茨海默症和癌症的研究。

在公报中，诺贝尔奖评审委员会指出，“基因靶向”的应用为人类的胚胎发育以及人类对抗衰老和疾病带来了希望。“在老鼠体内进行的‘基因靶向’已经渗透到生物医学的各个领域。在未来许多年内，它将继续帮助人类理解基因功能，继续造福人类。”公报中这样写道。 2007年度诺贝尔奖评选活动于8日在瑞典首都斯德哥尔摩拉开帷幕。瑞典卡罗林斯卡医学院当日宣布，将2007年度诺贝尔奖首个奖项——诺贝尔生理学/医学奖授予美国人马里奥·卡佩基、奥利弗·史密斯和英国人马丁·埃文斯 ，以表彰他们在干细胞研究方面尤其是“基因靶向”技术的发明方面所作的贡献。

2.基因敲除的实验步骤

(1)构建重组基因载体：

绝大多数的基因敲除策略都是基于同源重组的机制，其基因载体包括载体骨架、靶基因同源序列和突变序列及选择性标记基因等非同源序列，其中同源序列是影响同源重组效率的关键因素。

(2)用电穿孔、显微注射等方法

把重组DNA转入受体细胞（一般是胚胎干细胞）核内。

(3)三同源重组：

基因重组时以载体的同源序列取代染色体靶位序列，实现载体DNA同源目的序列与染色体靶位点的同源重组。

(4)筛选：

用选择培养基筛选已击中的细胞。

(5)表现型研究研究：

将击中细胞转移入胚胎使其生长成为转基因动物，对转基因动物进行形态观察及分子生物学检测。

3.RNAi引起的基因敲除

RNAi引起的基因敲除：由于少量的双链RNA就能阻断基因的表达，并且这种效应可以传递到子代细胞中，所以RNAi的反应过程也可以用于基因敲除。

4.近年

近年来，越来越多的基因敲除采用了RNAi这种更为简单方便的方法。