词条 | 核酸分子杂交技术 |
释义 | 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针(probe),待测核酸序列可以是克隆的基因征段,也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的,能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片段。根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。 核酸分子杂交技术主要有以下几种: Southern 杂交 Northern 杂交 原位杂交(ISH) 荧光原位杂交(FISH), 芯片杂交(属于固一液相杂交) 每一种杂交技术都有其特点,因探针的选择不同又可以衍生出许多相关的技术,在不同领域发挥着重要作用。 特点: (1)灵敏度高、特异性强; (2) 用于 DNADNA和RNARNA的定性、定量检测。 用途: (1) 检测特异 DNADNA序列的拷贝数、特定DNADNA区域的限制性内切酶图谱,判定基因的缺失、插入、重排现象; (2)特异基因克隆的筛选; (3)核酸序列的初略分析; (4) PCR技术的分子基础。 |
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