肝净注射液是由茵陈、栀子、板蓝根、黄芩等制成的棕红色中药注射剂，其主要成份为栀子苷、黄芩苷等，具有清热，利湿，解毒的功效。适用于肝胆湿热引起的急性、慢性肝炎。

基本信息

鉴别

检查

含量测定

主治及用法

制剂学研究

基本信息

肝净注射液

拼音名:Ganjing Zhusheye

英文名：书页号:GLG─179

标准编号：WS-10099(ZD-0099)-2002

【处方】 茵陈214g 栀子214g 板蓝根214g 胆汁膏20g 大黄43g 黄芩214g 聚山梨酯80 10ml

制成 1000ml

【性状】 本品为棕色或棕红色的澄明液体。

鉴别

(1)取本品20ml，蒸十，残渣加O．2％氢氧化钠甲醇溶液2ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点丁同一含4％醋酸钠以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 (2)取本品20ml，蒸干，残渣加丙酮2ml，超声处理使溶解，取上清液作为供试晶溶液。另取栀子苷对照品，加丙酮制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照溥层色谱法(中国药典2000年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述供试品溶液5μl、对照品溶液2μ l，分别点于同一硅胶G薄层板卜，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水(6:4:0.5:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干喷以5％香早醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 (3)取本品20ml，用醋酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取茵陈对照药材1.5g，加水30ml，加热回流1小时，滤过，滤液同法制成对照药材溶液。照薄层色曙法(中国药典2000年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(6:4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，在100℃加热5～10分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的监色荧光斑点。

检查

pH值 应为5.0～7.0(中国药典2000年版一部附录Ⅵ G)。 蛋白质 取本品1ml，加鞣酸试液1～3滴，混合，放置5分钟，不得出现浑浊。 树脂 取本品5ml，置分液漏斗中，加氯仿10ml，振摇提取，依法测定(中国药典2000年版一部附录Ⅸ S)，应符合规定 其他 应符合注射剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版一部附录Ⅰ U)

含量测定

照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录ⅥD)测定。 色谱条件及系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(12:88)为流动相；检测波长为240nm。理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500。 ． 对照品溶液的制备精密称取栀子苷对照品约10mg，置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。冉精密吸取卜述溶液5ml，置50ml量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml溶液含栀子苷40μg)。 供试品溶液的制备 精密吸取本品2ml．置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液15ml，置25ml量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品每1ml含栀子以栀子苷(C17H24O10)计，不得少于1.0mg。

主治及用法

【功能主治】 清热，利湿，解毒。用于急性肝炎，慢性肝炎属肝胆湿热证者。

【用法用量】 肌内注射， 一次2～4ml，一日2次。

【禁忌】 孕妇禁用。

【规格】 每支装2ml

【贮藏】 密封，黄阴凉处。

【有效期】 1.5年。

制剂学研究

肝净注射液的指纹图谱研究

1. 建立肝净注射液的HPLC-UV指纹图谱,获得对照图谱,为全面控制肝净注射液的质量提供新的依据。 方法:(1)提取:比较不同提取方法、提取溶剂及提取时间的提取效果,选择提取成分较多,提取率较高的提取条件。(2)色谱条件:选用合适的色谱柱及检测波长,调整流动相的组成、配比、流速,调节柱温,使色谱图符合指纹图谱研究要求。(3)系统适用性试验:在已确定的色谱条件下,考察指纹图谱中黄芩苷峰的分离度和理论板数。(4)专属性试验:精密吸取阴性溶液、供试品溶液及对照品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录130min内的色谱图。(5)精密度试验:取同一份供试品溶液,重复进样5次,比较所得指纹图谱的相似度。(6)重复性试验:取同一批肝净注射液6份,平行制备供试品溶液,进样,比较所得指纹图谱的相似度。(7)稳定性试验:取供试品溶液分别于0,2.5,5,7.5,12,24h进样,比较所得指纹图谱的相似度。(8)指纹图谱的建立:分别取肝净注射液5批,制备供试品溶液,进行指纹图谱分析。 结果:(1)提取:取肝净注射液1支,用0.45μm滤膜滤过后作供试液。(2)色谱条件:色谱柱:Shimadzu(Shim-pack VP-ODS)柱(4.6mm×150mm,5μm);柱温:25±0.15℃;流速:1ml/min;检测波长254nm;进样量:10μl。(3)系统适用性试验:按黄芩苷峰计算理论板数约为150000,与其它色谱峰的分离度大于1.5。(4)专属性试验:空白溶剂(甲醇)对测定无干扰,黄芩苷对照峰与供试品溶液图谱的26号峰(71.98min)相对应。(5)精密度试验:相似度均高于0.98,符合指纹图谱测定要求,精密度良好。(6)重复性试验:相似度均高于0.96,符合指纹图谱测定要求,重复性良好。(7)稳定性试验:相似度均高于0.98,符合指纹图谱测定要求,稳定性良好。(8)指纹图谱的建立:得到肝净注射液的指纹图谱。(9)数据分析:利用2004A版相似度软件进行分析,相似度在0.9～1.00为正品肝净注射液,品质较优。 结论:本文首次建立了肝净注射液的指纹图谱,得到其对照图谱,利用相似度分析对不同批次肝净注射液间的差异进行了研究,对肝净注射液的质量进行了综合评价,方法重复性和精密度良好,能简便快速地鉴别和区分伪品,有助于肝净注射液的标准化生产和质量控制。

2.1 大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.或药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎。其性味苦,寒。归脾、胃、大肠、肝、心包经。泻热通肠,凉血解毒,逐瘀通经。用于实热便秘,积滞腹痛,泻痢不爽,湿热黄疸,血热吐衄,目赤,咽肿,肠痈腹痛,痈肿疔疮,瘀血经闭,跌扑损伤,外治水火烫伤;上消化道出血。酒大黄善清上焦血分热毒。用于目赤咽肿,齿龈肿痛。熟大黄泻下力缓,泻火解毒。用于火毒疮疡。大黄炭凉血化瘀止血。用于血热有瘀出血症。大黄的干燥根根茎中含大量蒽醌衍生物,现代药理研究表明大黄酸(rhein),芦荟大黄素(aloe-emodin),大黄素(emodin),大黄素甲醚(physcion),大黄酚(chrysophanol)为其主要活性成分。 目的:建立肝净注射液中大黄的薄层色谱鉴别项,为科学评价与有效控制肝净注射液质量提供新方法。 方法:(1)提取:比较了不同提取方法不同的提取溶剂的提取效果,选择提取成分较多,提取率较高的提取条件。(2)色谱条件:选用合适的薄层色谱板和检视方法,调整展开剂的组成、配比,使色谱图符合薄层色谱研究的要求。(3)专属性试验:分别将阴性溶液、供试品溶液及对照品溶液各5μl点于薄层板进行展开。 结果:(1)提取:最佳提取条件为精密吸取注射液15ml,加HCl2ml,氯仿10ml,水浴加热回流1小时,放冷,移至分液漏斗,氯仿5ml洗三角瓶,取水层,再加氯仿15ml萃取2次,合并,低温蒸干,甲醇1ml溶解。(2)色谱条件:薄层板选用以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G板;展开剂:石油醚(30~60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1 )上层;检视方法:晾干后置365nm下观察;点样量:对照品与供试品均为5μl。(3)专属性试验:阴性溶液对测定无干扰,大黄对照药材的主斑点与供试品溶液图谱的主斑点相对应。 结论:本文建立了肝净注射液中大黄的薄层鉴别方法,能简便、快速地对肝净注射液中大黄进行鉴别,有助于肝净注射液的标准化生产及质量控制。

2.2 胆汁膏为猪科动物猪Sus scrofa domestica Brisson.胆汁的浓缩品。其性味苦,寒。归肝、胆、肺、大肠经。猪胆汁中主要成分为胆汁酸类,胆色素、粘蛋白、脂类及无机物等。胆汁酸中有鹅脱氧胆酸(chenodeoxycholic acid)、3a-羟基- 6-氧- 5α-胆烷酸(3α- hydroxy-6- oxo-5α-cholanic acid)和石胆酸(llthocholic acid),它们几乎完全与甘氨酸结合而存在。另含猪胆酸(hyocholic acid),猪去氧胆酸(hyodeoxycholic acid),3β,6α-二羟基胆烷酸(3β,6α-dihydroxycholanic acid)。具有清热,润燥,解毒,止咳平喘的功效。用于热病燥渴,目赤,喉痹,黄疸,百日咳,哮喘,泄泻,痢疾,便秘,痈疮肿毒。 目的:建立肝净注射液中胆汁膏的薄层鉴别方法,为全面控制肝净注射液的质量提供新的依据。 方法:(1)提取:比较了不同提取方法、提取溶剂的提取效果,选择提取成分较多,提取率较高的提取条件。(2)色谱条件:选用合适的薄层色谱板和检视方法,调整展开剂的组成、配比,使色谱图符合薄层色谱研究的要求。(3)专属性试验:分别将阴性溶液、供试品溶液及对照品溶液各5μl点于薄层板进行展开。 结果:(1)提取:取2ml注射液,加入2ml 40%NaOH装入气相小瓶封盖后置于120℃烘箱加热2小时,放冷,调pH至2-3,摇匀,离心,上清液用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣用乙醇2ml溶解。(2)色谱条件:薄层板选用以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G板;展开剂:异辛烷—乙醚—冰醋酸—正丁醇—水(10:5:5:3:1)的上层溶液;点样量:对照品与供试品均为5μl。(3)专属性试验:阴性溶液对测定无干扰,供试品溶液图谱的斑点与胆酸和猪取氧胆酸对照品的斑点相对应。 结论:本文建立了肝净注射液中胆汁膏的薄层鉴别方法,能简便、快速地对肝净注射液中胆汁膏进行鉴别,有助于肝净注射液的标准化生产及质量控制。

2.3绿原酸(chlorogenic acid,CA )是一种多酚类化合物,由一分子咖啡酸和一分子奎尼酸缩合脱水而成,是植物界广泛存在的一类次生物质,绿原酸用途广泛,研究表明,绿原酸具有抗菌活性。 目的:建立肝净注射液中绿原酸的含量测定方法,为有效地控制肝净注射液中茵陈的质量提供新的依据。 方法:(1)色谱条件:选用合适的色谱柱,调整流动相,流速,调节柱温,使色谱图符合液相色谱研究的要求。(2)专属性试验:精密吸取对照品溶液3μl、供试品溶液及阴性溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录20min色谱图。(3)系统适应性试验:在已确定的色谱条件下,考察图谱中绿原酸的分离度(4)线性试验:取绿原酸对照品溶液,分别进样1μl,2μl,5μl,10μl,25μl,测定峰面积,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。(5)重复性试验:取同一批肝净注射液5份,平行制备供试品溶液,进样,记录保留时间和峰面积。(6)稳定性试验:取供试品溶液分别于0,2,4, 12,24 h进样,记录保留时间和峰面积。(7)范围:制备最高限和最低限浓度的供试品溶液各3份;进样测定,记录保留时间和峰面积。(8)加样回收率试验 结果:(1)色谱条件:色谱柱:SHISEIDO ODS柱(4.6mm×150mm,5μm);柱温:25?C;流速:1.0ml/min;流动相:乙腈-0.1%磷酸(10∶90);检测波长:327nm。(2):专属性试验:分别精密吸取绿原酸对照品溶液3μl、供试品溶液和阴性对照品溶液各10μl,在以确定的色谱条件下进样测定,供试品色谱中在与绿原酸对照品色谱峰保留时间一致处有相应的色谱峰,阴性对照色谱在绿原酸峰保留时间一致处无色谱峰。(3)系统适应性试验:按绿原酸峰计算理论板数约为6700,绿原酸与相邻杂质峰的分离度为2.65 ( 1.5),达到良好分离。(4)线性试验:取绿原酸对照品溶液,分别进样1μl,2μl,5μl,10μl,25μl,测定峰面积,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。结果回归方程为:Y=3485730.91X +7622.40,r=0.9999,表明绿原酸在0.0899～2.2475μg范围内与呈良好的线性关系。(5)重复性试验:取同一批样品,制备供试品溶液6份,进样测定,结果平均含量为0.2708 mg·ml-1,RSD为1.87%(n=6),表明该方法重复性良好。(6)稳定性试验:精密吸取同一份供试品溶液,分别在1h,2h,4h,12h,24h进样测定峰面积,结果RSD%=0.28%(n=5),表明样品在24h内稳定。(7)范围:制备最高限和最低限浓度的供试品溶液各3份;进样测定,结果平均含量为0.2689mg·ml-1,RSD为1.07%。(8)加样回收率试验:绿原酸平均回收率为99.24%,RSD%为1.87%(n=6)。 结论:本文建立了测定肝净注射液中绿原酸含量的高效液相色谱方法,方法重复性和精密度良好,有助于肝净注射液的标准化生产和质量控制。

2.4黄芩苷(Baicalin)为唇形科植物黄芩Suutellaria baicalensis.Georgi的干燥根提取分离出来的一种黄酮类化合物,具有显著的生物活性,具有抑菌、利尿、抗炎、抗变态及解痉作用,并且具有较强的抗癌反应等生理效能。具有泻实火,除湿热,止血,安胎。治壮热烦渴,肺热咳嗽,湿热泻痢,黄疸,热淋,吐、衄、崩、漏,目赤肿痛,胎动不安,痈肿疔疮。 目的:建立肝净注射液中黄芩苷的含量测定方法,为有效地控制肝净注射液中茵陈的质量提供新的依据。 方法:(1)色谱条件:选用合适的色谱柱,调整流动相,流速,调节柱温,使色谱图符合液相色谱研究的要求。(2)专属性试验:精密吸取对照品溶液3μl、供试品溶液及阴性溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录20min色谱图。(3)系统适应性试验:在已确定的色谱条件下,考察图谱中黄芩苷的分离度。(4)线性试验:取黄芩苷对照品溶液,分别进样1μl,2μl,5μl,10μl,25μl,测定峰面积,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。(5)重复性试验:取同一批肝净注射液5份,平行制备供试品溶液,进样,记录保留时间和峰面积。(6)稳定性试验:取供试品溶液分别于0,2,4,12,24 h进样,记录保留时间和峰面积。(7)范围:制备最高限和最低限浓度的供试品溶液各3份;进样测定,记录保留时间和峰面积。(8)加样回收率试验。 结果:(1)色谱条件:色谱柱:SHISEIDO ODS柱(4.6 mm×150 mm,5μm);柱温:25?C;流速:1.0ml/min;流动相:甲醇-0.1%磷酸(45∶55);检测波长:276nm。(2):专属性试验:分别精密吸取黄芩苷对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10μl,在以确定的色谱条件下进样测定,供试品色谱中在与黄芩苷对照品色谱峰保留时间一致处有相应的色谱峰,阴性对照色谱在黄芩苷峰保留时间一致处无色谱峰。(3)系统适应性试验:按黄芩苷峰计算理论板数约为4600,黄芩苷与相邻峰的分离度为8.14( 1.5),达到良好分离。(4)线性试验:取黄芩苷对照品溶液,分别进样1μl,2μl,5μl,10μl,25μl,测定峰面积,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。结果回归方程为:Y=1.003 2 X +6.855 7,r=0.999 9,表明绿原酸在0.104 3～2.607 5μg范围内与呈良好的线性关系。(5)重复性试验:取同一批样品,制备供试品溶液6份,进样测定,结果平均含量为1.883mg·ml-1,RSD为0.99%(n=6),表明该方法重复性良好。(6)稳定性试验:精密吸取同一份供试品溶液,分别在1h,2h,4h,12h,24h进样测定峰面积,结果RSD%=0.78%(n=5),表明样品在24h内稳定。(7)范围:制备最高限和最低限浓度的供试品溶液各3份;进样测定,结果平均含量为1.771mg·ml-1,RSD为1.5%。(8)加样回收率试验:黄芩苷平均回收率为98.72%,RSD%为1.05%(n=6)。 结论:本文建立了测定肝净注射液中黄芩苷含量的高效液相色谱方法,方法重复性和精密度良好,有助于肝净注射液的标准化生产和质量控制。