概述

原理

试剂

仪器

操作方法

计算

注意事项

概述

二硫腙比色法也称双硫腙比色法，是食品分析和检验科学中常用于检验和分析食品中的锌的含量的一种分析方法。

原理

样品经消化后，在pH4.0~4.5时，锌离子与二硫腙生成紫红色配合物，溶于四氯化碳，与标准系列相比较进行定量。

试剂

1.C(CH3COONa)=2mol/L乙酸钠溶液：称取68g乙酸钠(CH3COONa·3H2O)，加水稀释至250ml。

2.C(CH3COOH)=2mol/L乙酸溶液：量取10.0ml冰乙酸，加水稀释至85ml。

3.乙酸-乙酸盐缓冲溶液C(CH3COONa)=2mol/L乙酸钠溶液与C(CH3COOH)=2mol/L乙酸溶液等体积混合，此溶液PH为4.7左右。用0.01％二硫腙四氯化碳溶液提取数次，每次10ml，除去其中的锌，至四氯化碳层绿色不变为止，弃去四氯化碳层，再用四氯化碳提取乙酸-乙酸盐缓冲液中过剩的二硫腙，至四氯化碳层无色，弃去四氯化碳层。

4.1:1氨水。

5.C(HCl)＝2mol/L盐酸：最取10ml盐酸，加水稀释至60ml。

6.C(HCl)＝0.02mol/L盐酸：吸取1ml C(HCl)＝2mol/L盐酸，加水稀释至100ml。

7.酚红指示剂：0.1％乙醇溶液。

8.20％盐酸羟胺溶液：称取20g盐酸羟胺，加60ml水，滴加1:1氨水，调节PH至4.0-5.5，以下操作同乙酸-乙酸盐缓冲溶液的处理。然后加水稀释至100ml。

9.25％硫代硫酸钠溶液：用C(CH3COOH)=2mol/L乙酸溶液调节PH至4.0-5.5。以下按试剂3中用0.01%二硫腙-四氯化碳溶液，处理。

10.0.01％二硫腙-四氯化碳溶液。

11.二硫腙使用液：吸取1.0ml的二硫腙-四氯化碳溶液，加四氯化碳至10.0ml，混匀。用1cm比色杯，以四氯化碳调节零点，于波长530nm处测吸光度(A)，用下式计算出配制100ml的二硫腙使用液(57％透光率)所需0.01％二硫腙-四氯化碳溶液毫升数(V)。

12.锌标准溶液：准确称取0.1000g锌，加10mlC(HCl)＝2mol/L盐酸，溶解后移入1000ml溶量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于100μg。

13.锌标准使用液：吸取1.0ml锌标准溶液，置于100ml的容量瓶中，加1mlC(HCl)＝2mol/L盐酸，以水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1μg锌。

仪器

分液漏斗、分光光度计。

操作方法

1.样品的消化：同“砷的测定”中硝酸-高氯酸-硫酸法或硝酸-硫酸法。

2.标准曲线的绘制

吸取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml锌标准使用液，分别置于125ml分液漏斗中，各加入C(HCl)＝0.02mol/L盐酸至20ml。漏斗中，备加c(HcL)＝o．02M1儿盐酸至20m1。然后分别加入10ml乙酸-乙酸盐缓冲液、1m125％硫代硫酸钠溶液，摇匀，再各加入10.0ml二硫腙使用液，剧烈振摇2min。静置分层后，四氯化碳层经脱脂棉滤入lcm比色杯中，以零管调节零点，于波长530nm处测定吸光度、绘制标准曲线或求出回归方程。

3.样品溶液和试剂空白液油定

吸取5.0ml~10.0ml消化后定容的样品溶液和相同量的试剂空白液，分别置于125m1分液漏斗中，加5m1水、0.5ml20％盐酸羟胺溶液，摇匀，再加2滴酚红指示剂，用1:1氨水调至红色，再多加2滴。再加5ml 0.01％二硫腙-四氯化碳溶液，剧烈振摇2min，静置分层。将四氯化碳层移入另一分液漏斗中，水层用少量二硫腙-四氯化碳溶液振摇提取，每次2mL~3ml，直至二硫腙-四氯化碳溶液绿色不变为止。合并提取液，用5m1水洗涤，四氯化碳层用C(HCl)＝0.02mol/L盐酸提取2次，每次10ml，提取时剧烈振摇2min，合并C(HCl)＝0.02mol/L盐酸提取液，并用少量四氯化碳洗去残留的二硫腙。以下自“加入l0ml乙酸-乙酸盐缓冲溶液”起，按标准曲线绘制操作方法进行操作。根据测得吸光度从标准曲线上查得相当于锌的含量，或将吸光度代入回归方程求得锌的含量。

计算

式中：

a1——测定用样品消化液中锌的含量(μg)

a0——试剂空白液中锌的含量(μg)；

m——样品质量(体积)[g(ml)]；

V1——样品消化波速体积(nII)；

V2——测定用样品消化液的体积(m1)。

注意事项

1.测定时加入硫代硫酸钠、盐酸羟胺和在控制pH值的条件下，可防止铜、汞、铅、铋、银和镉等离子的干扰。并能防止二硫腙被氧化。

2.所用玻璃仪器用10％一20％硝酸浸泡24h以上，然后用不含锌的蒸馏水冲洗洁净。

3.硫代硫酸钠是较强的配合剂，它不仅配合干扰金属，同时也与锌配合．所以只有使锌从配合物中释放出来，才能被二硫腙提取，而锌的释放又比较缓慢，因此必须剧烈根据2min。