| 词条 | ELISA |
| 释义 | 1 日本歌手外文名：ELISA 国籍：日本 出生地：神奈川县 出生日期：1989年4月14日 职业：歌手 经纪公司：ELITE MODEL MANAGEMENT JAPAN 代表作品：《幻梦之夜》，《hikari》 ◎ 经历生日：1989年4月14日0点44分 身高：166cm 神奈川县出身的女性歌手。 ELITE MODEL MANAGEMENT JAPAN所属。 2007年10月以单曲《euphoric field feat. ELISA》出道。 3岁开始学习钢琴；初一时加入合唱团，自此开始喜欢上唱歌。 初三时在“NHK全国合唱音乐会演（Concours）。 高一时在老师的帮助下开始接触歌剧（opera）。 喜欢的歌剧是莫扎特（Mozart）的《费加罗的婚礼》（"The Marriage of Figaro"）。 接着，为了探求自己这个方面的潜质，应招参加在今年（2007）7月举行的Model Audition “Elite Model Look”，成为最终的十强（Finalists）之一。 2007年7月自“elite MODEL LOOK 2007”应募者3000人入选10人之一。 在视听的审查员询问到关于模特儿的工作时回答“我并不想成为模特儿，而是歌手”，让她试唱后就决定一个月后出道。 现在就读大学的英文科，对于英文仅仅是“发音的程度……”。 从未住在国外。作为动画歌手，本人却对动画不甚了解。 与同为动画歌手的May'n关系非同一般，是May'n的男朋友（笑）。 为07年10月新番《ef-a tale of memories-》演唱OP《euphoric field》出道。 为08年4月新番《隐之王》演唱ED《HIKARI》，向人们展示出不逊色于本人容貌的美丽歌声（不管怎么看，ELISA都是那种气质美女，总给人一种成熟稳重的感觉，家庭应该是很有教养的吧），单曲CD《HIKARI》，里面收录了《HIKARI》和附歌《story》，深受好评。 目前为止以为这些部动画唱过歌曲，比如：《隐之王》《旋风管家》《某科学超电磁炮》《只有神知道的世界》，被称作是ACG界最有气质的古典美女。 2011年9月18日，在官网上宣布因为身体原因需要休养，音乐活动暂时休止。 2012年4月14日，在官网上发出声明：已经得到足够的修养，今后将继续演唱anime歌曲，并在2012年6月20日发售精选辑《rainbow pulsation ～ THE BEST OF ELISA ～》。 连续四年参演动画界最大规模的演唱会Animelo Summer Live： 《Animelo Summer Live 2008 -challange-》 演唱曲目《euphoric field》《HIKARI》 《Animelo Summer Live 2009 −RE:BRIDGE-》 演唱曲目《Wonder Wind》《ebullient future》 《Animelo Summer Live 2010 -evolution-》 演唱曲目《Dear My Friend》《Real Force》 《Animelo Summer Live 2011 -rainbow-》 演唱曲目《God only knows》《集积回路の梦旅人》 ◎ 单曲1st single： 《euphoric fieldfeat. ELISA 》 2007年10月27日发售 电视动画《ef - a tale of memories.》OP oricon最高位：19 累计销量：24,572 登场回数：19回 曲目： 1.euphoric field（Japanese） 词：酒井伸和 曲·编曲：天门 2.euphoric field（English） 词：酒井伸和、西田惠美 曲·编曲：天门 3.euphoric field（english TV-EDIT cho.2） 4.euphoric field（INST） 2nd single： 《HIKARI》 2008年5月21日发售 电视动画《隐王》ED1 oricon最高位：22 累计销量：2,662 登场回数：—— 曲目： 1.HIKARI 词：西田惠美 曲：杉森舞 编曲：前口渉 2.Story 词：香那、春和文 作曲：香那 编曲：m-takeshi 3.HIKARI（Instrumental） 4.Story（Instrumental） 3rd single： 《ebullient future》 2008年11月5日发售 电视动画《ef - a tale of melodies.》OP oricon最高位：14 累计销量：14,512 登场回数：19回 曲目： 1.ebullient future（English） 词：酒井伸和、西田惠美 曲·编曲：天门 2.ebullient future（Japanese） 词：酒井伸和 曲·编曲：天门 3.pray 词：酒井伸和 曲·编曲：柳英一郎 4.ebullient future（INST） 5.pray（INST） 4th single： 《Wonder Wind》 2009年5月20日发售 电视动画《旋风管家 第二季》OP oricon最高位：16 累计销量：8,653 登场回数：5回曲目： 1.Wonder Wind 词：六ツ见纯代 曲：田代智一 编曲：前口渉 2.凛々と 词：西田惠美 曲·编曲：菊田大介（Elements Garden） 3.Wonder Wind -Instrumental- 4.凛々と -Instrumental- 5th single： 《Dear My Friend -まだ见ぬ未来》 2009年11月4日发售 电视动画《某科学的超电磁炮》ED1 oricon最高位：13 累计销量：10,597 登场回数：—— 曲目： 1.Dear My Friend -まだ见ぬ未来へ- 词：春和文 曲：渡辺拓也 编曲：大久保薫 2.SMILE -You&Me- （电视动画《某科学的超电磁炮》12话ED） 词：西田恵美 作曲：渡辺拓也 编曲：増田武史 3.Dear My Friend -まだ见ぬ未来へ- E.M ver. 词：春和文 曲：渡辺拓也 编曲：前口渉 4.Dear My Friend -まだ见ぬ未来へ-（Instrumental） 5.SMILE -You&Me-（possennoue） 6.Dear My Friend -まだ见ぬ未来へ- E.M ver.（Instrumental） 6th single： 《Real Force》 2009年2月4日发售 电视动画《某科学的超电磁炮》ED2 oricon最高位：14 累计销量：11,709 登场回数：—— 曲目： 1.Real Force 词：六ツ见纯代 曲·编曲：菊田大介（Elements Garden） 2.ENDLESS ANTHOLOGY（Live ver.） 词·曲：上松范康（Elements Garden） 编曲：菊田大介 3.凛々と（Live ver.） 词：西田惠美 曲·编曲：菊田大介 4.Real Force（Instrumental） ELISA店长《アニメイトのうた》 2010年7月28日限量发售 曲目： 1.アニメイトのうた(开店ですっ！) 2.アニメイトのうた(闭店ですっ！) 3.Waterland[Live] 4.プロフェシアメドレー[Live] 5.アニメイトのうた(开店ですっ！)*店长休憩中 6.アニメイトのうた(闭店ですっ！)*店长休憩中 7th single： 《Special "ONE" 》 2010年10月27日发售 OVA《某科学的超电磁炮》ED oricon最高位：14 累计销量：—— 登场回数：6回 曲目： 1.Special "ONE" 词：春和文 曲：川崎里美 编曲：大久保薫 2.Heaven`s Sky 词：渡边亜希子 曲：村下雅俊 编曲：前口渉 3.Special "ONE"（OVA edit） 4.Special "ONE"（Instrumental） 5.Heaven`s Sky（Instrumental） Oratorio The World God Only Knows名义 《God only knows～集积回路の梦旅人》 2010年11月3日发售 电视动画《只有神知道的世界》OP&最终话ED oricon最高位：8 累计销量：17,591 登场回数：—— 曲目： 1.God only knows 词：西田惠美 曲：M.C.E、前口渉、木村香真良、柳田しゆ、mixakissa、すみだしんや 编曲：前口渉 第一幕 Chapter 1 曲：M.C.E. 第二幕 Chapter 2 曲：前口渉 第三幕 Chapter 3 曲：前口渉/木村香真良 第四幕 Chapter 4 曲：柳田しゆ 第五幕 Chapter 5 曲：mixakissa/すみだしんや 终幕 Reprise 曲：前口渉 ヴォーカルなし 歌：ELISA 2.集积回路の梦旅人（电视动画《只有神知道的世界》最终话ED） 词：若木民喜 曲：木村香具良、前口渉 编曲：前口渉 歌：下野紘、有坂美香&The Sunshowers、ELISA、川崎里実 3.God only knows （Instrumental） 4.集积回路の梦旅人（Instrumental） 5.God only knows 第三幕 （O.A. version） 歌：ELISA Oratorio The World God Only Knows名义 《A Whole New World God Only Knows》 2011年5月18日发售 电视动画《只有神知道的世界 第二季》OP oricon最高位：10 累计销量：10,654 登场回数：—— 曲目： 1.A Whole New World God Only Knows 词：西田惠美 曲：川崎里実 编曲：前口渉 歌：Lia、ELISA、DUO、Chorus 主唱：Lia、ELISA 2.A Brand New World God Only Knows 词：西田惠美 曲：川崎里実 编曲：太久保薰 歌：Lia、ELISA、DUO、Chorus 主唱：Lia、ELISA 3.A Whole New World God Only Knows（Instrumental） 4.A Brand New World God Only Knows（Instrumental） 8th single： 《Invisible Message》 2011年8月31日发售 剧场版《旋风管家 HEAVEN IS A PLACE ON EARTH》插入歌 oricon最高位：29 累计销量：2514 登场回数：—— 曲目： 1.Invisible Message 词：岩里佑穂 曲：森谷敏纪 编曲：大久保薫 2.忘れない记忆は、キミの物语 词：ELISA 曲：菊田大介 编曲：菊田大介 3.Invisible Message（Instrumental） 4.忘れない记忆は、キミの物语（Instrumental） 9th Single： 《SCARLET WINGS》 2011年11月9日发售 Xbox360游戏《迷宫クロスブラッド リローデッド》主题歌 oricon最高位：—— 累计销量：—— 登场回数：—— 曲目： 1.SCARLET WINGS 词：六ツ见纯代 曲·编曲：柳英一郎 2.Secret Labyrinth 词：西田惠美 曲·编曲：柳英一郎 3.SCARLET WINGS(short size) 4.SCARLET WINGS（Inst） 5.Secret Labyrinth（Inst） 6.SCARLET WINGS（Lounge ver） 《Secret Labyrinth》是《SCARLET WINGS》的英文版本 ◎ 专辑1st album： 《white pulsation》 中文译名：白色悸动 发行时间：2009年1月21日（Geneon Entertainment、商品番号GNCA-1198 GNCA-1199） 专辑曲目： 1.Prologue 曲·编曲：前嶋康明 2.euphoric field（English） 词：西田惠美、酒井伸和 曲·编曲：天门 3.ENDLESS ANTHOLOGY 词·曲：上松范康 编曲：菊田大介 4.HIKARI 词：西田惠美 曲：杉森舞 编曲：前口渉 5.时の迷宫 词：西田惠美 曲·编曲：あおい吉勇 6.Shining Wind 词：西田惠美 曲：佐伯高志 编曲：前口渉 7.BUTTERFLY～眠れぬ森の蝶々～ 词：及川眠子 曲：田代智一 编曲：大坪直树 8.ebullient future（English） 词：西田惠美、酒井伸和 曲·编曲：天门 9.鹏翼のプロフェシア 词·曲：志仓千代丸 编曲：水野大辅 10.Liar night 词：酒井伸和 曲·编曲：天门·柳英一郎 11.雪花幻想曲 词·曲·编曲：上松范康 12.ミカエルは眠る～dans le coeur～ 词：Satomi 曲：Shusui 编曲：大坪直树 13.Epilogue 曲·编曲：前口渉 2nd album： 《Rouge Adolescence》 中文译名：胭脂青春期/红色思春期 发行时间：2010年1月20日 （Geneon Entertainment、商品番号GNCA-1238 GNCA-1239） 专辑曲目： 1.Prologue of Rouge Adolescence 曲·编曲：川井宪次 2.Wonder Wind 词：六ツ见纯代 曲：田代智一 编曲：前口渉 3.Real Force 词：六ツ见纯代 曲·编曲：菊田大介 4.Dear My Friend -まだ见ぬ未来へ- 词：春和文 曲：渡辺拓也 编曲：大久保薫 5.Snowy Bell 词：酒井伸和 曲·编曲：天门 6.凛々と 词：西田惠美 曲·编曲：菊田大介 7.Absolute Perfection (Interlude) 曲：しほり 编曲：大久保薫 8.Waterland 词：岩里祐穂 曲：柳田しゆ 编曲：大久保薫 9.圣柜のプロフェシア 词·曲：志仓千代丸 编曲：水野大辅 10.Absolute Perfection 词：西田惠美 曲：しほり 编曲：大久保薫 11.慈しみのボレロ 作词：Satomi、作曲：Shusui、编曲：前口渉 12.Epilogue of Rouge Adolescence 曲·编曲：川井宪次 3rd album： 《Lasei》 中文译名：裸声 发行时间：2011年2月16日 （Geneon Entertainment、商品番号GNCA-1277 GNCA-1278） 曲目： 1.Prologue of Lasei 曲·编曲：川井宪次 2.God only knows 词：西田惠美 曲：M.C.E、前口渉、木村香真良、柳田しゆ、mixakissa、すみだしんや 编曲：前口渉 3.集积回路の梦旅人 词：若木民喜 曲：木村香具良、前口渉 编曲：前口渉4.Light To Unite 词：六ツ见纯代 曲·编曲：八木沼悟志 5.机械仕挂けのシンデレラ 词·曲：上松范康 编曲：菊田大介 6.Special "ONE"<album ver> 词：春和文 曲：川崎里実 编曲：大久保薫 7.真実の证 词·曲：ELISA 编曲：菊田大介 8.True my sight 词：酒井伸和 曲·编曲：天门 9.Reminiscence 词·曲·编曲：doriko 10.Heaven's Sky 词：渡边亜希子 曲：村下雅俊 编曲：前口渉 11.STONE CIRCLE 词：Shusui 曲：真下正树 编曲：大久保薫 12.深渊のプロフェシア 词·曲：志仓千代丸 编曲：真下正树 13.Epilogue of Lasei 曲·编曲：川井宪次 初回限定DVD： 1 ebullient future（English） 2 HIKARI 3 ミカエルは眠る～dans le coeur～ 4 光の雨 ※未発表曲 词：岩里祐穂、作曲：川崎里実、天门 编曲：天门 Best Album《rainbow pulsation ～ THE BEST OF ELISA ～》 中文译名：彩虹悸动 ～ 最好的ELISA ～ 发行时间：2012年6月20日 （Geneon Entertainment、商品番号GNCA-1332 GNCA-1333 ） 1.euphoric field ——1st single 电视动画「ef - a tale of memories.」OP 2.Real Force ——6th single 电视动画《某科学的超电磁炮》ED2 3.Wonder Wind ——4th single 电视动画《旋风管家 第二季》OP 4.Dear My Friend -まだ见ぬ未来へ- ——5th single 电视动画《某科学的超电磁炮》ED1 5.HIKARI ——2nd single 电视动画《隐王》ED1 6.ENDLESS ANTHOLOGY（complete ver.） ——人气歌曲 complete ver.本作初收录 7.ebullient future ——3rd single 电视动画《ef - a tale of melodies.》OP 8.God only knows ——电视动画《只有神知道的世界》OP 9.集积回路の梦旅人（ELISA歌唱ver.） ——电视动画《只有神知道的世界》最终话ED 10.A Whole New World God Only Knows ——与Lia合唱 电视动画《只有神知道的世界 第二季》OP 11.Special "ONE" ——7th single OVA《某科学的超电磁炮》ED 12.Invisible Message ——8th single 剧场版《旋风管家 HEAVEN IS A PLACE ON EARTH》插入歌 13.プロフェシア·トリロジー ——人气歌曲“鹏翼·圣柜·深渊のプロフェシア”的综合版本 本作初收录 14 SCARET WINGS ——9th single Xbox360游戏《迷宫クロスブラッド リローデッド》主题歌 15 TUNE IN PROMISE ——《パチスロ エイリヤン·ビギンズ》主题歌 本作初收录 16.爱·おぼえていますか ——fans呼声最高的翻唱歌曲 本座为重新录音版本 初回限定DVD： MUSIC CLIP 1 euphoric field 2.HIKARI 3.ebullient future 4.Wonder Wind 5.Dear My Friend -まだ见ぬ未来へ- 6.Real Force 7.Special "ONE" 8.Invisible Message TV-SPOT HIKARI ebullient future Wonder Wind Dear My Friend -まだ见ぬ未来へ- Real Force Special "ONE" Invisible Message white pulsation Rouge Adolescence Lasei ◎ 演唱会ELISA FIRST LIVE 「feel the pulsation」（2009年3月28日） ELISA 2nd LIVE 「歌って!ELISA先生。～EBISUでデきるモン!～」（2009年11月22日） ELISA 3rd LIVE 「Rouge Adolescence」（2010年4月29日） ELISA Acoustic Live 2010（2010年7月18日） ELISA Acoustic Live 2010 ～エリサンタのX’mas～（2010年12月13日） ELISA LIVE TOUR 2011 ～Birth of my Lasei～ 2011年4月9日爱知·ell.FITS ALL、4月10日大阪·ESAKA MUSE、4月16日东京·Shibuya O-EAST ◎ DVD1st Live DVD 《LIVE"Birth of my Lasei"》 2011年8月31日发售 收录曲 Real Force（电视动画《某科学的超电磁炮》ED2） Dear My Friend-まだ见ぬ未来へ-（电视动画《某科学的超电磁炮》ED） euphoric field~ebullient future（电视动画《ef - a tale of memories.》OP） God only knows~集积回路の梦旅人（电视动画《只有神知道的世界》OP） Wonder Wind（电视动画《旋风管家 第二季》OP） Sweet Little SAYONARA（新曲） 他、シングル曲人気曲を中心に収録予定 *2011年4月16日@Shibuya O-EASTでの公演を収録 【初回特典】 初回プレス分のみスリーブ仕様 ◎ 出演纪录店内出演 ELISA 4thシングル「Wonder Wind」発売记念イベント（石丸电気 SOFT2 7Fホール、コミックとらのあな秋叶原1号店 7Fイベントスペース、ディスクピア日本桥店 音楽馆 6Fイベントフロア） 「ELISA×とある科学の超电磁炮（レールガン）」発売记念イベント（渋谷HMV） ELISA/Rouge Adolescence 発売记念 いちにち店长イベント（アニメイト福冈天神店、ゲーマーズ博多店、アニメイト小仓店、アニメイト日本桥店、アニメイト天王寺店、アニメイト名古屋店、アニメイト仙台店、アニメイト郡山店、アニメイト大宫店、AKIHABARAゲーマーズ本店、アニメイト池袋店、アニメイト藤沢店） ELISA店长/アニメイトのうた 発売记念イベント（アニメイト仙台店、アニメイト郡山店、アニメイト大宫店、アニメイト池袋本店、アニメイト吉祥寺店、アニメイト藤沢店、アニメイト横浜店、アニメイト金山店、アニメイト日本桥店、アニメイト天王寺店、アニメイト福冈天神店） 「Lasei」リリースイベント（アニメイト日本桥店、アニメイト天王寺店、アニメイト三宫店、アニメイト秋叶原店、アニメイト吉祥寺店、アニメイト大宫、アニメイト渋谷店、アニメイト横浜店、アニメイト藤沢店） 活动出演 RONDO ROBE 2008（2008年6月28日） Animelo Summer Live 2008 -challange-（2008年8月30日） Animelo Summer Live 2009 −RE:BRIDGE-（2009年8月22日） 「Anime-TV CARNIVAL VOL.4」 NEO アイドルフェスティバル「TOgether2 A→B→C」 第4回 A-POP GENERATION 2009 6th TAM TOKYO ASIA MUSIC MARKET ELISA オン·ザ·ステージin明治大学（2009年11月1日） 浜松町グリーン·サウンドフェスタ-浜祭-（2009年11月3日） ブシロードカードゲームライブ2010（2010年2月6日） KOEI Presents 戦国武将祭（2010年3月7日） アニうたKITAKYUSHU2010（2010年3月14日） ANIMAX MUSIX SPRING 2010（2010年5月15日·16日） Anime Songs Night in Harajyuku ～jump to the world～（2010年7月4日 ） Animelo Summer Live 2010-evolution-（2010年8月28日） 电撃GENEONミュージックフェス（2010年9月26日） 飞兰×ELISA Talk&Live GLORIOUS DIVA～新世代の歌姫たち～（2010年10月10日） Live5pb.2010（2010年10月16日） ani-nation2010（2010年10月22日） 続!ELISA オン ザ ステージ in 明大祭（2010年10月31日） ANIMAX MUSIX FALL 2010（2010年11月3日） ジェネオン fripSide FESTIVAL 2010（2010年12月5日） DK Anime ComplexFes 2011（2011年1月23日） アニソン.JPOP.イベント2.5次元第3章（2011年1月29日） アニうた KITAKYUSHU 2011（2011年2月12日） ELISA x 飞兰 Hong Kong Live ～Effulgence～（2011年2月20日） ブシロードカードゲームライブ 2011（2011年2月27日） アニぱら音楽馆 EXTREME LIVE 2011（2011年3月6日） あにてれpresents アニソンぷらすライブ（2011年8月15日） Animelo Summer Live 2011 Rainbow（2011年8月27日） ◎ 番组正式播客 ELISAの教えて!アニメ先生（あっ!とおどろく放送局、2009年1月19日 - 3月30日） ELISAの教えて!アニメ先生 ～2nd season～（あっ!とおどろく放送局、2009年6月2日 - 2010年7月26日） ELISAのひとりでデきるモン!（Seesaa、2009年6月22日 - ） アニぱら音楽馆 (2010年4月 - ) ELISA の月ハジメ(2010年12月 - ) RADIO RONDO ROBE～DIVA’s PARTY～(2011年1月 - ) 电视嘉宾 あにてれ Presents アニソンぷらす+（テレビ东京、ゲストおよびジングル提供など） アニメ天国 アニぱら音楽馆 アニメ星人 超!アニメ天国（第13回·第14回） MUSIC JAPAN 新世纪アニソンSP.2 ガールズソングセレクション 广播嘉宾 文化放送 鷲崎健の超ラジ! 文化放送 桃井はるこの超!モモーイ Nack5 THE WORKS 文化放送 A&Gメディアステーション こむちゃっとカウントダウン 文化放送 RADIOアニメロミックス 文化放送 A&G 超RADIO SHOW～アニスパ!～ 文化放送 May'nのらじ☆たま 文化放送 伊藤かな恵の超ラジ!Girls USEN C/G26ch a-FAN FAN 11「三重野瞳のだからいいって言ってんじゃない！」 NHK-FM 今日は一日“帰って来たアニソン”三昧 2 酶联免疫吸附剂测定◎ 简介enzyme linked immunosorbent assay，ELISA。指将可溶性的抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上，进行免疫反应的定性和定量方法。1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA) 。ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题 ，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术( immunoenzymatic techniques ) 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术 。 ◎ 基本原理1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。 它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物）③酶作用的底物（显色剂）。测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。 其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单，方便讯速，特异性强。 ◎ 方法类型ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。 ◎ （一）双抗体夹心法双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下： （1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。 （2）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。 （3）加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。 （4）加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。 根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。 ◎ （二）双位点一步法在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步（图15-5）。这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。 在一步法测定中，应注意钩状效应（hookeffect），类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。 ◎ （三）间接法测抗体间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下： （1）将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。 （2）加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。 （3）加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。 （4）加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。 本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。 ◎ （四）竞争法竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下： （1）将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤。 （2）待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。洗涤。 （3）加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。 ◎ （五）捕获法测IgM抗体血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗本多用捕获法，先将所有血清IgM（包括特异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。操作步骤如下： （1）将抗人IgM抗体连接在固相载体上，形成固相抗人IgM。洗涤。 （2）加入稀释的血清标本：保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。 （3）加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合。洗涤。 （4）加入针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合。洗涤。 （5）加底物显色：如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在，是为阳性反应。 ◎ （六）应用亲和素和生物素的ELISA亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合。现在使用更多的是从链霉菌中提取的链霉亲和素（streptavidin）。生物素（biotin）又称维生素H，分子量244.31，存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物，生物素－羟基琥珀亚胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置，可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物素与ELISA偶联起来，就可大大提高ELISA的敏感度。 亲和素－生物素系统在ELISA中的应用有多种形式，可用于间接包被，亦可用于终反应放大。可以在固相上先预包被亲和素，原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合，通过亲和素－生物素反应而使生物素化的抗体或抗在相化。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量，而且使其结合点充分暴露。另外，在常规ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代，然后连接亲和素－酶结合物，以放大反应信号。 ELISA 普遍用作非放射性同位素的成键化验. 在这种方法中, 通常标准配体是固定的, 通过加入溶液相受体或蛋白质来使之成键. 通过加入与受体特异性反应的抗体来定量成键的受体, 而且最初抗体的量以加入第二种能显色的抗体测量. 第二种抗体能识别抗体的末端, 在其末端的碱性磷酸酶或过氧化物酶等与酶发生反应, 从而使溶液显色。 ◎ 特点该法相较其他方法而言，有几大特点： ◎ 灵敏性高该测定法的灵敏度来自作为报告集团的酶。众所周知, 酶是一种有机催化剂，很少量的酶即可诱导大量的催化反应 ，产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。ELISA实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。 ◎ 特异性强其特异性来自抗体或抗原的选择性。抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，所以抗原抗体反应具有高度的特异性。 ◎ elisa的应用实例elisa的简便、敏感使它得到越来越广泛的应用，现代仪器设备的发展使elisa的操作流程更加规范化，稳定性和重复性进一步提高。在临床检验或实验研究中，elisa可广泛应用于多种抗原和抗体、肿瘤相关抗原、激素和血液中的一些蛋白成分的检测。以抗HBs检测(elisa双抗原夹心法)为例，应用举例如下。 原理 将HBsAg包被到固相载体表面，加入待检血清，血清中的抗HBs与固相HBsAg纬合，形成HBsA8—抗HBS复合物，再与酶标HBsAg反应，加人酶的底物，颜色的深度与待检血清中所含抗HBs量成正比。反应层次为包被HBsAg—待检抗HB5—酶标HB—sAg—底物。 试剂 (1)包被工作液 包被缓冲液(o．05mDyl碳酸盐缓冲液PH值为9．5)(原液)。 (2)封闭液 0.01M磷酸盐缓冲液 (3)酶结合物稀释液 磷酸盐缓冲液：(pH值为7．2)含0．1%吐温—20和 (4)HBSAb酶结合物工作液 酶结合物稀释液+测乙肝表面抗体酶结合物(原液)。 (5)HBsAb阴性对照 (PH值为7.0~7.2)：选用质检合格的HBsAB阴性血清+0.1% Prcolin300,配制阴性对照。 (6)HBsAb阳性对照 (pH值为6.5~7.0)：选用质检合格的HBsAB阳性血清，配制阳性对照时经稀释液适当稀释。 操作方法 (1)包被 用包被液稀释包被用HBsA8至所需要量，每孔加0.1mL，置4℃24h，用蒸馏水洗1次，每次均需要注满各孔。 (2)封闭 用封闭液封闭，每孔加0.2mL， (3)加样 每块板均设阳性对照、阴性对照和空白对照50PL，加入酶标抗体，混匀后，盖封板纸； (4)孵育 置37℃30min。 (5)洗涤 用洗涤液洗5次 (6)显色 每孔加底物0.1mL，37℃10min。 (7)终止 每孔加2M硫酸0.05ml终止反应。 3 意大利女歌手◎ 意大利女歌手全名 Elisa Toffoli 出生地 Monfalcone 国籍 意大利 出生日期 1977年12月 现居住地 美国 代表作 《Then Comes the Sun》 ◎ 基本介绍Elisa Toffoli 1977年12月出生于意大利东北地区的Monfalcone。幼年时即展现出了舞蹈，绘画，表演和写作方面的才能，但之后的历程证明了她在音乐方面有着更加非凡的天赋。她在11岁时就开始写歌，15岁时开始活跃在意大利的电视歌唱大赛上。当她18岁时，来到了美国加州的Berkeley，和曾为Whitney Houston，Aretha Franklin和Zucchero制作专辑的知名制作人Corrado Rustici合作，开始为自己的首张专辑做准备。(daniellos) ◎ 主要专辑-《Pipes & Flowers》1998 ◎ 《Asile's World》2001《Then Comes the Sun》2001 《Pearl Days》2004 《Swan》2005 《Dancing》2008 《Heart》2006 |
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