Easysep步骤

个人经验

Easysep步骤

本操作说明是为配合EasySep磁极（18000）使用而设计的。如果使用EasySep大磁极（18001），请访问网址www.stemcell.com/techincal/18001-PIS.pdf 。

1. 准备浓度为5×107细胞/ml的培养液培养的单核细胞悬液。置于一个12×75mm聚苯乙烯试管。每试管不要超过2ml（即1×108细胞）。

* 推荐使用FalconTM 5ml的圆底聚苯乙烯管（Becton Dickinson,货号＃352058）

2. 按50ul抗体/ml细胞悬液的比例，加入EasySep负选人造血祖细胞抗体混合物（例如：1ml细胞悬液加入50ul抗体混合物）。混匀，室温孵育15分钟。

3. 加入EasySep 磁微粒，用移液器上下吹打五次以上，使之充分混匀。避免使用涡旋震荡器。磁微粒加入量为50ul/ml（例如：1ml细胞悬液加入50ul磁微粒）。混匀，室温孵育15分钟。

注意：试剂盒提供过量的磁微粒，抗体混合液用完后可将其丢弃。

4. 把细胞培养液补充体积到2.5ml。用移液管在试管中轻轻上下吹打2～3次使细胞混匀。将试管（无盖）置于磁极中。静置10分钟。

5. 将磁极连试管一起拿起，连续缓慢倾倒磁极盒试管，将需要的未吸附细胞转移至另一个新的12×75mm的聚苯乙烯管中。标记了磁微粒的非目标细胞由于磁极的磁场的吸引，仍然留在原来的管子中。保持磁极与试管倒置状态2-3秒，然后使试管口恢复向上的位置。

* 不要摇晃或者擦拭粘在试管口的液滴。

6. 从EasySep磁极中取出装有非目的细胞的试管，并将含有目的细胞的新试管置于磁极中，准备下一轮的磁微粒分离。

个人经验

从20ml血中可分出单核细胞数目为：2.5×107/ml，需加入抗体和磁珠各25ul。