乳及乳制品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定14 原理

试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，用镀铜镉粒使部分滤液中的硝酸盐还原为亚硝酸盐。在滤液和已

还原的滤液中，加入磺胺和N-1-萘基-乙二胺二盐酸盐，使其显粉红色，然后用分光光度计在538 nm 波

长下测其吸光度。

将测得的吸光度与亚硝酸钠标准系列溶液的吸光度进行比较，就可计算出样品中的亚硝酸盐含量和

硝酸盐还原后的亚硝酸总量；从两者之间的差值可以计算出硝酸盐的含量。

15 试剂和材料

测定用水应是不含硝酸盐和亚硝酸盐的蒸馏水或去离子水。

注：为避免镀铜镉柱（16.10）中混入小气泡，柱制备（17.1）、柱还原能力的检查（17.2）和柱再生（17.3）时所用

的蒸馏水或去离子水最好是刚沸过并冷却至室温的。

15.1 亚硝酸钠（NaNO2）。

15.2 硝酸钾（KNO3）。

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15.3 镀铜镉柱

镉粒直径0.3 mm～0.8 mm。也可按下述方法制备。

将适量的锌棒放入烧杯中，用40g/L 的硫酸镉（CdSO4·8H2O）溶液浸没锌棒。在24 h 之内，不断

将锌棒上的海绵状镉刮下来。取出锌棒，滗出烧杯中多余的溶液，剩下的溶液能浸没镉即可。用蒸馏水

冲洗海绵状镉2 次～3 次，然后把镉移入小型搅拌器中，同时加入400 mL 0.1 mol/L 的盐酸。搅拌几秒

钟，以得到所需粒度的颗粒。将搅拌器中的镉粒连同溶液一起倒回烧杯中，静置几小时，这期间要搅拌

几次以除掉气泡。倾出大部分溶液，立即按17.1.1 至17.1.8 中叙述的方法镀铜。

15.4 硫酸铜溶液：溶解20 g 硫酸铜（CuSO4·5H2O）于水中，稀释至1000 mL。

15.5 盐酸-氨水缓冲溶液：pH 9.60～9.70。用600 mL 水稀释75 mL 浓盐酸（质量分数为36 %～38 %）。

混匀后，再加入135 mL 浓氨水（质量分数等于25 %的新鲜氨水）。用水稀释至1000 mL，混匀。用精

密pH 计调pH 值为9.60～9.70。

15.6 盐酸(2 mol/L)：160 mL 的浓盐酸（质量分数为36 %～38 %）用水稀释至1000 mL。

15.7 盐酸（0.1 mol/L）：50 mL 2 mol/L 的盐酸用水稀释至1000 mL。

15.8 沉淀蛋白和脂肪的溶液：

15.8.1 硫酸锌溶液：将53.5 g 的硫酸锌（ZnSO4·7H2O）溶于水中，并稀释至100 mL。

15.8.2 亚铁氰化钾溶液：将17.2 g 的三水亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]溶于水中，稀释至100 mL。

15.9 EDTA 溶液：用水将33.5 g 的乙二胺四乙酸二钠（Na2C10H14N2O3·2H2O）溶解，稀释至1000 mL。

15.10 显色液 1：体积比为450: 550 的盐酸。将450 mL 浓盐酸（质量分数为36 %～38 %）加入到550

mL 水中，冷却后装入试剂瓶中。

15.11 显色液 2：5 g/L 的磺胺溶液。在75 mL 水中加入5 mL 浓盐酸（质量分数为36 %～38 %），然

后在水浴上加热，用其溶解0.5 g 磺胺（NH2C6H4SO2NH2）。冷却至室温后用水稀释至100 mL。必要时

进行过滤。

15.12 显色液3 ： 1 g/L 的萘胺盐酸盐溶液。将0.1 g 的N-1- 萘基- 乙二胺二盐酸盐

（C10H7NHCH2CH2NH2·2HCl）溶于水，稀释至100 mL。必要时过滤。

注：此溶液应少量配制，装于密封的棕色瓶中，冰箱中2 ℃～5 ℃保存。

15.13 亚硝酸钠标准溶液：相当于亚硝酸根的浓度为0.001 g/L。

将亚硝酸钠在110 ℃～120 ℃的范围内干燥至恒重。冷却后称取0.150 g，溶于1000 mL 容量瓶中，

用水定容。在使用的当天配制该溶液。

取10 mL 上述溶液和20 mL 缓冲溶液（15.5）于1000 mL 容量瓶中，用水定容。

每1 mL 该标准溶液中含1.00 μg 的NO2

−。

15.14 硝酸钾标准溶液，相当于硝酸根的浓度为0.0045 g/L。

将硝酸钾在110 ℃～120 ℃的温度范围内干燥至恒重，冷却后称取1.4580 g，溶于1000 mL 容量瓶

中，用水定容。

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在使用当天，于1000 mL 的容量瓶中，取5 mL 上述溶液和20 mL 缓冲溶液（15.5），用水定容。

每1 mL 的该标准溶液含有4.50 μg 的NO3

−。

16 仪器和设备

所有玻璃仪器都要用蒸馏水冲洗，以保证不带有硝酸盐和亚硝酸盐。

16.1 天平：感量为 0.1 mg 和1 mg。

16.2 烧杯：100 mL。

16.3 锥形瓶：250 mL，500 mL。

16.4 容量瓶：100 mL、500 mL 和1000 mL。

16.5 移液管：2 mL、5 mL、10 mL 和20 mL。

16.6 吸量管：2 mL、5 mL、10 mL 和25 mL。

16.7 量筒：根据需要选取。

16.8 玻璃漏斗：直径约 9 cm，短颈。

16.9 定性滤纸：直径约 18 cm。