词条 | 限制性酶切片段差异显示(RFDD-PCR) |
释义 | RFDD-PCR不是直接扩增cDNA,而是首先限制性酶切cDNA,再在酶切后的cDNA片段两边加上特殊接头进行扩增。正是RFDD-PCR系统使用了一系列特殊接头和引物,特异性PCR引物的使用和下游的PCR反应使RFDD-PCR分析具有高度的重复性,解决了第一代差别显示系统的重复性问题;因为RFDD-PCR技术不使用以poly(A)为引物的PCR扩增,因而该系统对原核和真核系统皆适用;在第一代的差异显示系统中,下游引物特异性结合poly(A)尾,因此与3'端未翻译区域相对应的差异表达序列大部分被鉴别出,而RFDD-PCR 采用优先切割翻译序列的限制性内切酶(如TaqI),因此可以优先展示编码区,更加适合于下游功能分析;使用RFDD-PCR或得差异显示基因后,与disploy Fit网络相连后,可以确定哪个基因是已经研究过的,哪些是未知基因,对下一步研究有很好的知道意义。总之,RFDD-PCR中高度严谨的PCR可以产生结果一致的基因表达图谱,重点放大和展示编码区,对原核及真核RNA都有用,大大消除假阳性。 |
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