基本信息

内容简介(目录 序言)

基本信息

出版社: 科学出版社; 第1版 (2004年1月1日)平装: 225页

正文语种: 简体中文

开本: 16

ISBN: 7030125886, 9787030125880

条形码: 9787030125880

商品尺寸: 25.6 x 18.6 x 1 cm

商品重量: 381 g

ASIN: B00116NCDY

内容简介

《现代生物技术前沿：基因免疫的原理和方法》共分十四章，系统介绍基因免疫的基本原理、研究方法和应用现状，主要有以下方面的内容：基因疫苗工作原理、基因疫苗抗原基因的筛选与克隆、基因疫苗的构建、基因疫苗制备、基因疫苗免疫方法、基因疫苗免疫效果检测、影响基因疫苗免疫效果的因素、基因疫苗的安全性、细菌病基因疫苗、病毒病基因疫苗、寄生虫病基因疫苗、肿瘤基因疫苗和控制动物生产性能的基因疫苗等。《现代生物技术前沿：基因免疫的原理和方法》反映了当前国际上基因免疫研究的前沿进展和我国学者的研究成就。

目录

前言

1 概论

1.1 基因疫苗发展概况

1.2 基因疫苗的特点

1.2.1 抗原性强

1.2.2 保护时间长

1.2.3 改造方便

1.2.4 制备和储运方便

2 基因疫苗工作原理

2.1 天然免疫机制

2.2 基因疫苗经肌肉组织免疫的抗原呈递

2.3 基因疫苗经黏膜和皮肤组织免疫的抗原呈递

2.3.1 直接免疫

2.3.2 用重组减毒胞内菌系统

2.3.2.1 胞内菌的胞内定位及其对基因疫苗的呈送

2.3.2.2 携带基因疫苗重组减毒沙门氏菌诱发机体免疫应答的机制

3 基因疫苗抗原基因的筛选与克隆

3.1 疾病有关基因疫苗的候选基因筛选

3.1.1 将亚单位疫苗的编码基因作为候选基因

3.1.1.1 细菌病亚单位疫苗的编码基因作为基因疫苗候选基因

3.1.1.2 病毒病亚单位疫苗编码基因作为基因疫苗的候选基因

3.1.1.3 寄生虫基因疫苗的候选基因

3.1.2 从病原体中筛选保护性抗原基因

3.1.2.1 表达文库筛选候选基因

3.1.2.2 免疫筛选法

3.1.2.3 化学分解法

3.1.3 定位克隆

3.1.3.1 家系连锁分析法

3.1.3.2 等位基因共享法

3.1.3.3 群体相关分析法

3.1.3.4 dDNA筛选

3.1.4 mRNA差异显示技术筛选候选基因

3.1.4.1 酶降解减数cDNA文库法

3.1.4.2 减数cDNA文库筛选法

3.1.4.3 PCR放大差异法

3.1.4.4 差异反转录PCR法和差异消减显示法

3.1.4.5 基因组错配扫描法

3.1.4.6 限制性标记cDNA扫描

3.1.4.7 消减杂交

3.1.4.8 mRNA差异显示技术改进

3.2 候选抗原基因克隆

3.2.1 克隆已知多肽的基因

3.2.1.1 多肽N端序列指导PCR引物合成法

3.2.1.2 特异性抗体筛选表达文库法

3.2.1.3 人工合成候选基因

3.2.2 克隆已知序列基因家族新成员

3.2.2.1 同源探针筛选法

3.2.2.2 PCR放大建库法

3.2.3 功能性筛选

3.2.4 常用的克隆载体

3.2.4.1 质粒特性

3.2.4.2 质粒载体必须具备的条件

3.2.4.3 常用的克隆质粒

4 基因疫苗的构建

4.1 构建基因疫苗的载体

4.1.1 真核表达载体的结构特点

4.1.1.1 增强子一启动子元件

4.1.1.2 载体的选择标记

4.1.1.3 哺乳动物细胞和大肠杆菌的复制起始点

4.1.1.4 转录终止信号和多聚腺苷酸化信号

4.1.2 影响外源基因表达的因素

4.1.3 常用于构建基因疫苗的载体

4.1.3.1 pcDNA3.1 /Zeo(+/-)

4.1.3.2 pBudCE4

4.1.3.3 pRc/CMV2

4.1.3.4 pRc/RSV

4.2 基因疫苗构建方法

4.2.1 抗原基因和载体的制备

4.2.2 抗原基因和载体的连接

4.2.2.1 连接方式

4.2.2.2 连接反应条件

4.2.3 重组质粒转化受体菌

4.2.3.1 氯化钙共沉淀法

4.2.3.2 电穿孔法

4.2.4 重组质粒的筛选与鉴定

4.2.4.1 插入片段长度鉴定

4.2.4.2 插入片段方向性鉴定

4.2.4.3 DNA序列测定

4.3 重组质粒在真核细胞中表达与检测

4.3.1 重组质粒导入真核细胞的方法

4.3.1.1 脂质体介导的基因转移

4.3.1.2 磷酸钙共沉淀法

4.3.1.3 电穿孔法

4.3.2 抗原基因在真核细胞中表达的检测

4.3.2.1 蛋白水平的检测

4.3.2.2 核酸水平的检测

5 基因疫苗制备

5.1 基因疫苗小量制备

5.1.1 受体菌筛选

5.1.2 培养条件优化

5.1.3 基因疫苗提取纯化

5.2 基因疫苗中量制备

5.2.1 基因疫苗中量提取

5.2.2 基因疫苗中量纯化

5.2.2.1 细菌的裂解和基因疫苗初步提取

5.2.2.2 质粒纯化

5.2.2.3 重组质粒浓缩

5.2.3 基因疫苗质量监控

5.2.3.1 浓度测定

5.2.3.2 纯度测定

5.2.3.3 分子质量鉴定

5.2.3.4 限制性内切核酸酶图谱分析

5.2.3.5 内毒素

5.3 基因疫苗大量制备

5.3.1 中试规模

5.3.2 工程菌的发酵条件

5.3.2.1 发酵监测参数

5.3.2.2 发酵方式

5.3.2.3 基质浓度

5.3.2.4 温度

5.3.2.5 pH

5.3.2.6 溶解氧浓度

5.3.2.7 二氧化碳

5.3.2.8 泡沫控制

5.3.3 基因疫苗大量纯化工艺

5.3.3.1 细胞破碎

5.3.3.2 重组质粒粗提

5.3.3.3 粗提物纯化

5.3.4 大量制备的质量控制

5.3.4.1 原料质量控制

5.3.4.2 培养过程质量控制

5.3.4.3 纯化过程质量控制

5.3.4.4 成品质量控制

6 基因疫苗免疫方法

6.1 基因疫苗接种方法

6.1.1 肌肉注射法

6.1.1.1 肌肉组织预处理

6.1.1.2 肌肉注射操作实例

6.1.1.3 影响重组质粒进入肌细胞的因素

6.1.2 基因枪导入法

6.1.2.1 皮下基因免疫的组织学基础

6.1.2.2 基因枪工作原理

6.1.2.3 重组质粒包被方法

6.1.3 黏膜表面涂布法

6.1.4 静脉注射法

6.1.5 腹腔注射法

6.1.6 不同免疫途径的免疫效果比较

6.2 免疫剂量和加强免疫

6.2.1 免疫剂量

6.2.2 加强免疫

7 基因疫苗免疫效果检测

7.1 体液免疫检测

7.1.1 酶联免疫吸附试验

7.1.1.1 夹心ELISA

7.1.1.2 竞争法测抗原或抗体

7.1.1.3 间接法测抗体

7.1.2 生物素一抗生物素蛋白系统

7.1.2.1 标记抗生物素蛋白一生物素检测法

7.1.2.2 桥联抗生物素蛋白一生物素检测法

7.1.2.3 抗生物素蛋白一生物素化酶复合物检测法

7.1.3 生物素一链霉抗生物素蛋白系统

……

8 影响基因疫苗免疫效果的因素

9 基因疫苗的安全性

10 细菌病基因疫苗

11 病毒病基因疫苗

12 寄生虫基因疫苗

13 肿瘤基因疫苗

14 控制动物生产性能的基因疫苗

主要参考文献

序言

基因免疫（gene immunization）是20世纪90年代初开始研究的免疫新技术。将抗原基因重组到真核表达载体上，经过一定的方法转染到动物机体细胞内，表达的抗原经过抗原呈递激活机体免疫系统，诱导产生特异性的体液免疫和（或）细胞免疫应答，这种新的免疫方法叫作基因免疫，又称为核酸免疫或者.DNA免疫。这类新的重组质粒疫苗称为基因疫苗（gene vaccine），是第三代疫苗。