化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA),是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。

词条概述

氯霉素

化学发光免疫分析原理

实验所需仪器

检测方法(试剂盒组成 使用说明 B、样品制备)

储存条件及有效期

词条概述

化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA),是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。

氯霉素

氯霉素(Chloramphenicol)是一种广谱抗生素。由于其具有效果好以及价格低廉等优点，目前已被普遍应用于各类家禽、家畜、水产品及蜂制品的各种传染性疾病的治疗。然而氯霉素有其严重的副作用,它会抑制人体骨髓的造血功能，从而引起再生障碍性贫血和粒细胞缺乏症。目前，我国已禁止其使用。

化学发光免疫分析原理

在化学发光板微孔条上预包被偶联抗原，样本中残留的氯霉素与微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗氯霉素药物的抗体，加入酶标二抗后，再加入底物用光子计数仪测定各孔的光子计数，光子计数的强度随氯霉素浓度的升高而逐渐下降，成良好的负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中氯霉素类药物的残留量。

实验所需仪器

（1）微孔板酶标仪450nm/630nm

（2）旋转蒸发仪/氮气吹干装置

（3）均质器

（4）振荡器

（5）涡旋仪

（6）离心机

检测方法

试剂盒组成

1、微量测试孔：每条8孔，每板12条

2、氯霉素标准溶液：

0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05 ppb，1.5ml/瓶

3、96孔化学发光板×1块 （包被有偶联抗原）

4、标准液×6瓶：（1ml/瓶）

0ppb，1ppb，3ppb，9ppb，27ppb，81ppb

5、高浓度标准品：（1ml/瓶）1ppm

6、酶标记抗体

7、显色剂

8、20×浓缩洗涤液

9、2×浓缩复溶液

使用说明

A、注意事项

1、使用前先将氯霉素标准溶液6瓶，浓缩萃取稀释液，浓缩洗涤液，酶标记物，底物溶液及微量测试孔条置于室温下，回温30分钟。

2、洗涤工作液

用去离子水将20×浓缩洗涤液按1：19体积比进行稀释　3、回温后，取出所需微量测试孔条，将剩余板条立即放回铝箔袋中用胶带封好，置于4o℃保存。

B、样品制备

1.待测物为组织样本，则依以下方法进行处理

a.取3g样本、4ml蒸馏水与6ml 乙酸乙酯置入离心管中，震荡约5分钟，使其充分混合均匀。

b.离心10分钟(3000rpm)，取4ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中，于50℃下氮气吹干(温度请勿超过50oC)。

c.加入1ml萃取稀释液，震荡约10秒钟后备用。

C、操作步骤

本产品的酶标记物与氯霉素标准溶液均直接使用，无需再稀释。

1、于适当微孔中分别加入100mL标准溶液(0,0.05,0.15,0.45,1.35和4.05ppb)。

2、在另外的微孔中加入100mL 已完成前处理的样品溶液。

3、再于每一微孔中另再加入50mL酶标记物。

4、轻敲盘子四周，使其充分混合后于室温下避光静置温育1小时。

5、将微孔中的反应液甩掉，再将洗液加满每一微孔后甩掉，重复洗3次。

6、最后一次甩掉后，在吸水纸上拍干。

7、于每一微孔中加入底物溶液100mL后，轻敲盘子四周，使其充分混合。

8、于室温下避光静置温育20分钟。

9、于每一微孔中加入100mL反应终止液。

10、用化学发光仪于下判读。

D、判定

1. 计算B/B0值。用样品或标准液吸光度值(B)除以零标准吸光度值(B0)再乘以100%。

2. 以B/B0值为纵坐标，以标样浓度的对数值为横坐标，做标准半对数曲线。

3. 根据每个样品的B/B0值就可从曲线上读出相对应样品的浓度。

4. 由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。

E、标准曲线

F、灵敏度

氯霉素试剂检测盒的平均检测下限为0.05ppb，此浓度之吸光值与阴性标准溶液(0ppb)之吸光值有明显的差异。

G、 特异性

针对以下抗生素进行交叉反应之测试，结果如下：

Chloramphenicol =100%

Chloramphenicol(free base) <0.1%

Gentamycin <0.1%

Tetracycline <0.1%

Penicillin G <0.1%

Sulfamethazine <0.1%

H、再现性

针对氯霉素检测试剂盒精密度测试，重复6次，所得不同浓度标准溶液的吸光值变异系数(%CV).

I、回收率

组织(添加1.0ppb)104~117%

储存条件及有效期

储存条件：于4-8℃保存，不得冻存。

有效期：12个月。