胶质芽孢杆菌（硅酸盐细菌菌种）NY 882—2004 简介

1　范围

本标准规范了农用硅酸盐细菌菌种的特征、要求、检验方法、评价方法以及菌种的纯化、复壮和保藏。

本标准适用于农用微生物菌剂和微生物肥料生产中使用的硅酸盐细菌菌种。

2　规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 17419-1998 含氨基酸叶面肥料

NY/T 301-1995 有机肥料速效钾的测定

NY/T 798-2004 复合微生物肥料

3　术语

硅酸盐细菌菌种 Silicate-Dissolving Bacteria Culture

是指一类在土壤中能通过自身的生命活动，分解硅铝酸盐类矿物，释放钾素营养，改善植物的营养条件，并具备生产应用性能的细菌纯培养物。

4　菌种特征

硅酸盐细菌菌种包括胶质芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus）和土壤芽孢杆菌（Bacillus edaphicus）两个种。

4.1　细胞形态

营养体：粗长杆状，两端钝圆，革兰氏染色反应不定，产生聚β-羟基丁酸盐（PHB）颗粒。在培养基　A.1　上(参见附录　A　)菌体大小为（1.0　～　1.2）×　（2.5　～　7.0）μm　，菌体周围有厚荚膜。

芽孢：壁厚，椭圆形，中生或近端生，芽孢囊不膨大或微膨大。

4.2　菌落形态

在　A.1　培养基平板上：菌落圆形，无色，隆起，胶质粘稠，透明或半透明，边缘整齐。

4.3　生物学特征

好氧或兼性厌氧生长，水解淀粉，接触酶反应阳性，氧化酶和卵磷脂酶反应阴性，在无氮培养基（参见附录A.2）上生长良好，生长温度10　℃　～　45　℃。

5　要求

5.1 菌种要求纯培养物，无杂菌。

5.2 硅酸盐细菌菌种技术指标见表1。

表1 硅酸盐细菌菌种技术指标

项 目　指 标

解钾能力-速效钾相对增加量， %　≥　20

发酵
代谢
产物　植物激素总量， mg/L　≥　1.0

游离氨基酸总量， mg/L　≥　50.0

有机酸总量， mg/L　≥　500.0

耐热能力-芽孢存活率， %　≥　70

发酵周期， h　≤　606　检验方法

6.1　菌种纯度检验

在适宜培养基上培养，观察菌落和菌体形态，若有杂菌丢弃或对其进行纯化，纯化方法见 8.1.2 。

6.2　解钾能力的测定

速效钾相对增加量的测定方法见附录　B。　

6.3　发酵代谢产物测定

6.3.1　发酵条件

在适宜培养条件下，发酵周期结束后取样测定发酵液中代谢产物的含量。以不接种的发酵培养液作对照。发酵培养基见附录　A.3　。

6.3.2　植物激素的测定

见附录　C　。

6.3.3　游离氨基酸的测定

见附录　D　。

6.3.4　有机酸的测定

见附录　E　。

6.4　芽孢存活率测定

6.4.1测定方法

菌悬液在　65　℃　条件下恒温　30　min　杀死营养体　，制成芽孢悬液。芽孢悬液　80　℃　恒温水浴处理　10　min　，将处理前和处理后的芽孢悬液稀释涂布在适宜培养基上，适宜条件下培养　2　d　～　4　d　，计菌落数。三次重复。活菌数测定方法应符合NY/T 798-2004中5.3.2的要求。

6.4.2芽孢存活率计算

按式(1)　计算

……(1)

式中:

-- 芽孢存活率（% ）

n0 -- 处理前芽孢悬液的菌落平均数（cfu/mL）

n1 -- 处理后芽孢悬液的菌落平均数（cfu/mL）