mRNA减法杂交技术

mRNA减法杂交（subtractive hybridization）技术又叫做差减cDNA克隆。它是通过构建差减文库(subtractive library)得以实现的。

定义：

减法杂交是用过量的参照细胞的mRNA或cDNA与目的细胞的cDNA或mRNA(又称目的序列)杂交，形成的RNA-cDNA杂交体是两种细胞共有的，将其扣除。剩下的cDNA或mRNA可以标记成探针(称减法或扣除探针)，从前述的目的细胞的cDNA文库中筛选目的克隆；还可以用来构建文库，即减法文库。减法文库实质上是除去了一大批高丰度非特异性的cDNA。文库中含有的是特异表达的cDNA克隆及其他一些低丰度的mRNA的cDNA克隆。

原理：

减法杂交的本质是除去那些普遍共同存在的cDNA序列，从而使欲分离的目的基因的序列得到有效的富集，提高了分离的敏感性。减法杂交工作原理：从表达目的基因的组织（以下简称[+]提取mRNA所转录为cDNA，然后与无目的基因表达的组织（简称[-]）提取的mRNA做过量杂交，在[+]、[-]组织中均表达的基因产物形成cDNA/mRNA双链杂交分子，而特异mRNA反转录的cDNA仍保持单链状态，将这种单链cDNA分离出来即为差异表达的序列。