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词条 Oligo(dT)
释义

定义

多聚胸腺嘧啶、T重复寡核苷酸,就是只有胸腺嘧啶组成的核苷酸链。

应用

1.oligo(dT) capture

因为Oligo(dT)与mRNA的Poly(A)尾巴可以发生特异性结合,所以用Oligo(dT)特异结合到mRNA上Poly(A)尾端,以此可以特异地将mRNA从总RNA中分离出来。属于亲和层析技术。

2.反转录(RT-PCR)

因绝大多数真核细胞mRNA 3’端具有Poly(A)尾,Oligo(dT)与其配对,仅mRNA可被反转录。由于Poly(A) RNA仅占总RNA的1-4%,故此种引物合成的cDNA比随机六聚体作为引物所得到的cDNA在数量和复杂性方面均要小。但是在反转录从mRNA获得cDNA时,也可以用随机六聚体引物和特异性引物。

随机六聚体引物:当特定mRNA由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时,可采用随机六聚体引物这一不特异的引物来拷贝全长mRNA。用此种方法时,体系中所有RNA分子全部充当了cDNA第一链模板,PCR引物在扩增过程中赋予所需要的特异性。通常用此引物合成的cDNA中96%来源于rRNA。

特异性引物:最特异的引发方法是用含目标RNA的互补序列的寡核苷酸作为引物,若PCR反应用二种特异性引物,第一条链的合成可由与mRNA 3’端最靠近的配对引物起始。用此类引物仅产生所需要的cDNA,导致更为特异的PCR扩增。

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更新时间:2025/3/20 11:26:07