CVTK细胞增殖与毒性检测试剂盒（全称Cell Vitality Test Kit ）(原名CCK-8)为MTT法的替代方法，是锐赛生物公司研发的一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

检测原理：WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂1-Methoxy PMS存在的情况下，可以被还原生成橙黄色水溶性的甲臜（Formazan） (图1)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

试剂用途：可用于细胞增殖检测、细胞毒性检测、药物筛选、肿瘤药敏试验等。

CVTK试剂提供了一种灵敏度高、操作简便、使用安全的细胞增殖与毒性检测方法。与传统的MTT法相比具有明显的优势：

1、即开即用，无需预配，无需放射性同位素和有机溶剂；

2、实验步骤少，操作简单，省时省力；

3、产物水溶性，无需换液，尤其适合于悬浮细胞；

4、灵敏度高，数据可靠，重复性好；

5、对细胞毒性低，可多次测定选取最佳测定时间，线性范围更宽；

6、适合高通量药物筛选；

使用方法：

1. 在96孔板中接种细胞悬液 (100 ul /孔 )，通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞，细胞毒性实验每孔约5000个细胞。具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素调整。

2. 若进行细胞毒性实验，按照实验需要培养并给予0-10ul特定的药物刺激，处理一段适当的时间。若进行细胞增殖实验，则跳过此步，直接加入CVTK进行检测。

3. 每孔加入10ul CVTK溶液。如果起始的培养体积为200ul，则需加入20ul CVTK溶液，以此类推。可以用加相应量细胞培养基和CVTK但不加细胞的孔作为空白对照，若担心所使用的药物会干扰检测，需设置加相应量细胞培养液、药物和CVTK溶液但不加细胞的孔作为空白对照。

4. 在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围适宜的一个时间点用于后续实验。

5. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度，若无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。如果样品为高浑浊度的细胞悬液，可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。

6. 如果需要暂时不测定O.D值，可以向每孔中加入10ul 0.1M HCl溶液或者1% w/v的SDS溶液，室温下避光保存，24小时内吸光度不会发生变化。

注意事项：

1. 使用96孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，请注意蒸发问题。可将96孔板外围一圈加培养基、水或PBS保湿。同时，可以把96孔板置于培养箱内靠近水盘的位置以缓解蒸发。

2. 铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀，建议铺板过程中注意时常混匀，防止因细胞沉淀造成不均匀。

3. 培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同。在正式实验前，建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入CVTK试剂后的培养时间。

4. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待测物质有氧化性或还原性，可在加CVTK之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。若药物影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

5. 加入CVTK后请前后左右轻轻晃动培养板数次，使培养基和CVTK充分混匀。

6. 加入CVTK时，如果细胞培养时间较长，培养基颜色或pH值已变化，建议换用新鲜的培养基。

7. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。