异质系克隆

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异质系克隆

是指在某些放线菌中，两个多重标记的营养缺陷型亲本杂交时，供体染色体片段进入受体细胞后形成的局部杂合核在分裂过程中发生染色体交换和减数。结果在同一菌丝体形成各种单倍体种组孢子。这样由一个杂合核演化繁殖形成的菌落叫异质系克隆。

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马—牛异种克隆胚胎及其线粒体异质性的研究

沈彦军

【摘要】： 本研究以新疆伊犁马的体细胞为供体,牛卵母细胞为受体,构建马—牛异种克隆胚胎,探讨了马—牛异种克隆体外培养发育的影响因素,建立了马—牛异种克隆胚胎的体外培养体系,此外,本研究还利用Taqman定量PCR法,对马—牛异种克隆胚胎附植前各时期胚胎中的线粒体组成进行定量分析。结果表明,牛的卵母细胞能支持马体细胞进行重编程,马—牛异种克隆胚胎线粒体存在异质性。本研究对探讨利用异种克隆技术繁育优良马匹和探索异种克隆机制奠定了一定的基础,提供了参考依据。 1.马体细胞系的建立: 利用贴壁培养法建立了耳成纤维细胞系、胎儿成纤维细胞系和颗粒细胞系,并分别对这三种细胞系进行了细胞生物学特征观察和染色体核型及倍性统计分析。所建立的三种细胞系形态均一、染色体倍性稳定,完全满足体细胞核移植对供体细胞的要求。 2.马—牛无透明带卵异种克隆胚胎的构建及体外培养体系的建立: ①本研究创建了显微挤压去核与无透明带手工融合相结合方法构建马—牛异种克隆胚胎。分析了不同激活方法、不同体外培养液、体细胞不同处理方式以及显微注射核移植方法对马—牛异种重构胚融合率和胚胎发育的影响。结果表明,利用接触抑制调节的耳成纤维细胞为供体,采用无透明带手工融合法构建马—牛异种重构胚具有较高的融合率(90.33%),并且经A23187处理5min+6-DMAP处理6h激活后,用mCR1aa体外培养液培养,卵裂率较高(83.65%),且卵裂球大小均一、碎片少、胚胎质量较高,并发育到囊胚(2.72%)。 ②通过对马—牛异种克隆与牛的同种克隆的发育能力进行比较,发现牛的卵母细胞能够支持马的供体细胞去分化,进行核重编程。但是由于二者的物种距离较远,异种克隆胚胎的发育能力远低于同种克隆胚胎,囊胚率为(2.71% vs 37.48%)。 3.马—牛异种克隆胚胎附植前各时期胚胎中的线粒体组成进行定量分析: ①在所检测的七个胚胎发育前期的马—牛异种克隆胚胎中,线粒体存在异质性,并且马的线粒体相对含量较少,只占牛的0.08%(异常桑葚胚期)～0.42%(囊胚期)。 ②受体牛的mtDNA拷贝数由1-细胞期到4-细胞呈逐渐增加趋势,从8-细胞期到桑葚胚期,呈逐渐减少趋势,而马的mtDNA拷贝数在1-细胞期到囊胚期整体呈现增长趋势。并且在8-细胞期,二者的线粒体拷贝数都减少。因此,推测马—牛异种克隆胚胎在8-细胞～16细胞期发生MET,并且胚胎基因组支持供体马的线粒体的遗传复制。 ③在桑葚胚期供体马的mtDNA和受体牛的mtDNA拷贝数都发生不同程度的的减少,分别减少到159和1.84×105,而且二者的比值也锐减到0.09%,显著低于1-细胞期。推测线粒体和核基因组之间的相互作用出现紊乱,并导致异种克隆胚胎的发育停滞,其具体机制还需进一步研究。

【关键词】：马 牛 异种克隆 线粒体 实时定量PCR

【学位授予单位】：中国农业科学院

【学位级别】：硕士

【学位授予年份】：2009

【分类号】：S821;S823;Q813

【DOI】：CNKI:CDMD:2.2009.152732