说明书

鉴别方法

乙肝健片对鸭乙型肝炎病毒感染的治疗效果

说明书

【成份】花锚草、黄芪、甘草。

【性状】本品A片为黄色糖衣片，除去糖衣后，显褐色；味苦。B片为白色糖衣片，除去糖衣后，显褐色；味甜。

【用途】 利胆退黄，改善肝功，调节免疫机能。用于急慢性乙型肝炎和其他肝炎。

【作用】乙肝健(三普乙肝健片)具有清热解毒,疏肝利胆,伍以黄芪、甘草益气托毒,健脾和中,起到扶正健脾、助正驱邪之目的,又避免了苦寒败胃之害,对肝损害有保护作用,促进肝细胞再生,使坏死组织修复加快,防止肝糖原减少的作用。

【用法】 口服，A、B片合用，一次各2--3片，一日3次。

【不良反应】偶见轻度胃肠不适，饭后服用可减轻。

【禁忌】孕妇忌用。

【贮藏】密闭，防潮。

【有效期】三年

【参考价】49.5元

鉴别方法

(1)取本品A片4片，除去糖衣，研细，加氯仿8ml，摇匀，静置，滤过，残渣加甲醇10ml，振摇2分钟，滤过，取滤液3ml，置试管内，加数滴盐酸及少量镁粉，溶液显橙色。

(2)取本品为B片4片，除去糖衣，研细，用70%乙醇60ml分三次提取,合并上清液，水浴蒸干，加水10ml使溶解，滤过。取滤液5ml，分置两试管内,一管中加入0.1mol/L盐酸溶液5ml，另一管中加入0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml，强烈振摇两管，泡沫持续10分钟以上不消失。

(3)取[鉴别](2)项下的剩余滤液置试管内，加5%α－萘酚乙醇溶液数滴，摇匀,沿管壁缓缓加入浓硫酸1ml，两液面交界处显紫红色环。

(4)取[浸出物]项下的剩余滤液10ml，浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取花锚对照药材2g，加氯仿10ml，同法制成对照药材溶液。照簿层色谱法(附录ⅦB)试验,吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯氯仿(10:4:4)为展开剂,展开,取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的棕褐色斑点。

乙肝健片对实验性肝损伤的作用及其毒性的研究　一、对实验性肝损伤的作用

（一） 实验方法

取大白鼠30只随机分为三组，第一组为对照组，只给蒸馏水；第二组为四氯化碳肝损伤组，第三组用四氯化碳造成肝损伤后给乙肝健作为治疗组。三组动物处死后测定血清谷丙转氨酶活力，并取肝左叶固定染色后观察肝组织变化。且用PAS法显示肝糖原。

（二） 实验结果

1、 血清谷丙转氨酶活力测定：正常对照组为216±36.4，肝损伤组为436.3±108.8，给药组为268.1±40.0，P<0.01,有非常显著的差异，显示药物对四氯化碳引起的肝损伤有较好的保护作用。

2、 肝脏组织学观察：和正常对照组相比，肝损伤组小叶轮廓不够清楚，肝细胞普遍有点坏死，其中三分之一切片可见到灶状坏死，绝大部分切片上肝细胞有明显的脂肪性变，偶见气球样变，汇管区有炎性细胞浸润。治疗组肝小叶轮廓清楚，坏死程度轻微，未见灶状坏死。仅部分切片上可见到脂肪性变细胞，而且程度明显比损伤组为轻。汇管区有少量炎性细胞浸润。总之，除尚有一定的脂肪性变外，几乎与正常对照组相似。

3、 糖原含量：正常对照组肝糖原含量丰富，以++++为主，单纯肝损伤组肝糖原明显减少，以++为主，治疗组肝糖原含量比单纯损伤组明显增加以+++为主，另有1/3接近++++。

4、 核糖核酸含量：正常对照组肝细胞内RNA含量丰富，以++++为主，单纯肝损伤组明显减少，其中2/3为++-+++，1/3为++。治疗组肝细胞内RNA含量明显高于单纯损伤组，有1/3为+++，2/3为++++，即基本与正常对照组相似或接近。

二、急性毒性实验——半数致死量测定

实验用小白鼠灌胃给药，剂量至135g/kg时仍无死亡，反复验证结果相同。

三、亚急性毒性实验

取大白鼠30只随机分为三组，第一组为对照组，第二组为极量组，第三组为三倍极量组。实验前称每个动物的体重，查外周血象，以后每天记录活动、进食、粪便等情况，另外每七天称体重一次查血象一次，于第15天的上午每组处死动物一半，取血测定血清谷丙转氨酶活力，取心、肝、肾作组织切片检查，另一半于停药后一周处死，作上述同样检查。结果各组动物每次测得的红细胞、白细胞、血小板数，不论与正常对照组相比还是给药前后的自身对比，均在正常范围之内，统计学无显著差异。说明乙肝健在三倍极量下对外周血象无影响。各组动物的心、肝、肾组织切片与正常对照组相比，均未见明显差异，说明乙肝健在三倍极量下对心、肝、肾等器官无明显影响。

四、其他实验

（一）对呼吸血压的影响 实验证明乙肝健对犬的呼吸血压和心率无明显影响。

（二）对心脏的影响 家兔实验给药前后未发现心电图有明显改变。

结论

现在认为，四氯化碳造成肝损伤首先是内质网受损，多核糖体离散，蛋白质合成障碍，继而线粒体肿胀、破裂，能量产生减少，转氨酶漏出，最后细胞变性和坏死。由于蛋白质合成障碍，甘油三脂不能结合成脂蛋白而排出，故脂肪堆积。

已知RNA在蛋白质合成、细胞分裂、再生等方面都有着重要作用。我们的实验证明乙肝健能增加肝细胞内的RNA，可能促进了蛋白质的合成，并从而使肝细胞再生活跃。由于肝细胞的再生能力增强，肝损伤组织的修复加快，血清谷丙转氨酶下降。由于蛋白质合成增加，甘油三脂的转运加速，脂肪沉积减少。肝细胞内糖原增加反映了线粒体氧化酶功能的恢复，糖原合成能力加强。

乙肝健片对鸭乙型肝炎病毒感染的治疗效果

中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所

一日龄北京鸭，经腿胫静脉注射上海麻鸭DHBV-DNA阳性鸭血清，7天后将感染DHBV雏鸭随机分组，每组5-6只不等，给药组分3个剂量组，分别为2.5、5和10g/kg组，口服，一天2次，10 天。设病毒对照组，以生理盐水代替药物。阳性药用无环鸟苷，口服给药100mg/kg，一天2次，10天。在感染后第7天即用药前（T0）、用药第5天（T5）、用药第10天（T10）和停药后第3天（P3），自鸭腿胫静脉取血，分离血清，计算血清DHBV-DNA密度，以杂交斑点OD值作为标本DHBV-DNA水平值。

结果

（一） 一日龄北京鸭感染DHBV后，血清DHBV-DNA动态

三批实验感染鸭72只血清DHBV-DNA全部阳性。病毒对照组17只雏鸭感染后第7天血清DHBV-DNA全部阳性，第1、2批实验全程21天内血清DHBV-DNA水平感染后基本平稳。第3批全程21天感染后第5天、10天血清DHBV-DNA有下降，与给药前比较有显著性差异。

（二） 阳性药无环鸟苷（ACV）对DHBV感染鸭血清DHBV-DNA影响

给药第5、10天（T5、T10）和停药后3天（P3）与给药前（T0）的OD值比较，下降有非常显著性差异（P<0.01），给药后对血清DHBV-DNA抑制率，给药第5、10天、给药前与病毒对照组做成组分析有非常显著性差异（P<0.01）。但停药后3天未见显著差异，说明有明显的反跳现象。

（三） 乙肝健在DHBV感染鸭体内对鸭血清DHBV-DNA的影响

三批实验结果表明（见表1、表2）

第一批实验：10g/kg组在给药第5、10天和停药后3天时，鸭血清DHBV-DNA OD值与给药前比较有非常明显的抑制作用（P<0.01），亦未见毒性反应。给药后血清DHBV-DNA水平与给药前比较计算抑制%，和对照组抑制%做成组对比分析，10g/kg组在给药第10天和停药3天有非常显著抑制作用（P<0.01），5g/kg组在给药第10天有显著抑制作用（P<0.05）。

第二批实验：10g/kg组在给药第10天鸭血清DHBV-DNA OD值与给药前比较有明显的抑制作用（P<0.05），亦未见毒性反应。给药后血清DHBV-DNA水平与给药前比较计算抑制%，与对照组抑制%作成组对比分析，10g/kg组在给药第5天有显著抑制作用（P<0.05）。5g/kg组在给药第5、10天和停药后3天时，鸭血清DHBV-DNA OD值与给药前比较有显著抑制作用（P值分别为<0.05、<0.01、<0.05），亦未见毒性反应。给药后血清DHBV-DNA水平抑制%，与对照组抑制%作成组对比分析，也有显著性。

第三批重复实验：本批实验DHBV病毒感染对照鸭血清DHBV-DNA水平在感染后第5、10天时有自然波动，第21天又上升。给药组给药后第5、10天和停药后3天血清DHBV-DNA与感染对照组比较，OD值和抑制%在给药后都有明显和非常明显抑制作用，结果与第1批实验一致。

表1 鸭乙型肝炎病毒感染鸭体内口服乙肝健治疗组与病毒

感染对照组鸭血清DHBV-DNA OD值比较

实验 批次　组 别　剂量g/kg bid×10　鸭数（只）　鸭血清DHBV-DNA OD490值（X±SD）

T0　T5　T10　P3

Ⅰ　生理盐水　
　6　0.42±0.10　0.43±0.15　0.56±0.14　0.34±0.09

乙肝健　2.5　6　0.30±0.09　0.59±0.12*　0.54±0.13**　0.35±0.16

5.0　5　0.36±0.11　0.44±0.08　0.28±0.12　0.43±0.04

10.0　6　0.99±0.19　0.63±0.24**　0.28±0.10**　0.34±0.16**

Ⅱ　生理盐水　
　6　0.41±0.05　0.52±0.15　0.40±0.10　0.37±0.12

乙肝健　2.5　5　0.35±0.06　0.37±0.13　0.46±0.16　0.35±0.20

5.0　5　0.58±0.12　0.42±0.17*　0.28±0.11**　0.31±0.10*

10.0　5　0.62±0.26　0.44±0.09　0.35±0.07*　0.32±0.07

Ⅲ　生理盐水　
　5　0.34±0.03　0.26±0.04**　0.29±0.01*　0.32±0.04

乙肝健　2.5　6　0.38±0.10　0.28±0.08**　0.34±0.11　0.37±0.05

5.0　6　0.50±0.22　0.31±0.07*　0.29±0.02　0.28±0.07

10.0　5　0.68±0.21　0.28±0.10*　0.21±0.01**　0.22±0.07*

ACV　0.1　6　0.63±0.23　0.31±0.09**　0.24±0.07**　0.52±0.16*表2 鸭乙型肝炎病毒感染鸭口服乙肝健治疗组与病毒感

染对照组鸭血清DHBV-DNA水平抑制率的比较

实验 批次　药物　剂量g/kg bid×10　鸭数
（只）　抑制率（%）
T5 T10 P3

Ⅰ　病毒对照组　
　6　-8.47　-43.61　15.42

乙肝健　2.5　6　-52.91　-95.57　-20.81

5.0　5　-27.92　24.72*　-28.63

10.0　6　36.70　70.56**　65.28**

Ⅱ　病毒对照组　
　6　-25.69　2.01　11.95

乙肝健　2.5　5　-4.94　-34.08　4.73

5.0　5　28.98*　51.08**　44.87*

10.0　5　20.65*　36.91　33.47

Ⅲ　病毒对照组　
　5　21.39　13.01　2.96

乙肝健　2.5　6　24.66　12.31　-6.21

5.0　6　32.92　32.81　33.72

10.0　5　54.84*　65.32**　64.00**

ACV　0.1　6　48.98**　58.84**　15.00结论

乙肝健在鸭乙型肝炎病毒感染鸭体内治疗实验三批实验结果表明：鸭乙型肝炎病毒感染鸭在感染后第7天口服乙肝健治疗，10g/kg一天2次10天对感染鸭血清DHBV-DNA水平的抑制效果显著；5g/kg组亦有一定抑制作用。阳性药无环鸟苷（ACV）口服对DHBV-DNA的抑制作用显著但停药后有反跳。