亚硝酸钠在盐酸存在条件下与具有芳伯氨基化合物发生重氮化反应，定量生成重氮盐。根据亚硝酸钠的消耗量可计算出药物有效成分的含量。

一、重氮化法

（一）定义

以亚硝酸钠液为滴定液的容量分析法称为重氮化法（亦亚硝酸钠法）。

（二）原理

芳香伯胺类药物，在盐酸存在下，能定量地与亚硝酸钠产生重氮化反应。依此，用已知浓度的亚硝酸钠滴定液滴定（用永停法指示终点），根据消耗的亚硝酸钠滴定液的浓度和毫升数，可计算出芳伯胺类药物的含量。

反应式： ArNH2+NaNO2+2HCl→[Ar-N+≡N]Cl-+NaCl+2H2O

（三）滴定条件

1.酸的种类及浓度

（1）重氮化反应的速度与酸的种类有关，在HBr中比在HCl中为快，在HNO3或H2SO4中则较慢，但因HBr的价格较昂，故仍以HCl最为常用。此外，芳香伯胺类盐酸盐的溶解度也较大。

（2）重氮化反应的速度与酸的浓度有关，一般常在1～2mol/L酸度下滴定，这是因为酸度高时反应速度快，容易进行完全，且可增加重氮盐的稳定性。如果酸度不足，则已生成的重氮盐能与尚未反应的芳伯胺偶合，生成重氮氨基化合物，使测定结果偏低。

[Ar-N+≡N]Cl-+ArNH2→Ar-N=N-NH-Ar+HCl

当然，酸的浓度也不可过高，否则将阻碍芳伯胺的游离，反而影响重氮化反应的速度。

2.反应温度

重氮化反应的速度随温度的升高而加快，但生成的重氮盐也能随温度的升高而加速分解。

[Ar-N+≡N]Cl-+H2O→Ar-OH+N2↑+HCl

另外，温度高时HNO2易分解逸失，导致测定结果偏高。实践证明，温度在15℃以下，虽然反应速度稍慢，但测定结果却较准确。如果采用“快速滴定”法，则在30℃以下均能得到满意结果。

3.滴定速度

快速滴定法：

将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，用亚硝酸钠滴定液迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，继续缓缓滴定，至永停仪的电流计指针突然偏转，并持续1分钟不再回复，即为滴定终点。

4.苯环上取代基团的影响

苯胺环上，特别是在对位上，有其它取代基团存在时，能影响重氮化反应的速度。

（1）亲电子基团，如-NO2、-SO3H、-COOH、X等，使反应加速。

（2）斥电子基团，如-CH3、-OH、-OR等，使反应减慢。

（3）对于慢的重氮化反应常加入适量KBr加以催化。

二、亚硝基化反应

芳仲胺类化合物，也可用NaNO2滴定液滴定，但所起反应并不是重氮化，而是亚硝基化，

NO

∣

ArNHR+NO2-+H+→ArN-R+H2O

反应量的关系仍然是1：1。习惯上把这种测定方法叫做亚硝基化滴定，以别于重氮化滴定。两种方法统名为亚硝酸钠法。

三、指示终点方法

（一）指示剂法

1.外指示剂

2.内指示剂

（二）永停法

四、滴定液的配制与标定

亚硝酸钠滴定液

1.配制 间接法配制

2.标定 用基准对氨基苯磺酸标定，以永停法指示终点。

3.贮藏 置玻璃塞的棕色玻瓶中，密闭保存。

五、注意事项

1.将滴定管尖端插入液面2/3处进行滴定，是一种快速滴定法。

2.重氮化温度应在15～30℃，以防重氮盐分解和亚硝酸逸出。

3.重氮化反应须以盐酸为介质，因在盐酸中反应速度快，且芳伯胺的盐酸盐溶解度大。在酸度为1～2mol/L下滴定为宜。

4.近终点时，芳伯胺浓度较稀，反应速度减慢，应缓缓滴定，并不断搅拌。

5.永停仪铂电极易钝化，应常用浓硝酸（加1～2滴三氯化铁试液）温热活化。

6.亚硝酸钠滴定液应于玻塞棕色玻璃瓶中避光保存。

六、适用范围

1.芳香族第一胺类药物。

2.水解后具有芳香第一胺结构的药物。

3.还原后具有芳香第一胺结构的药物。

七、允许差

本法的相对偏差不得超过0.3%。

第十章 氮测定法

一、定义

测定化合物中含氮元素量的分析方法称为氮测定法。

二、原理

将供试品置凯氏烧瓶中，加硫酸、硫酸钾（或无水硫酸钠）、无水硫酸铜，加热裂解，将氮变为铵盐，然后碱化反应进行蒸馏使氨释放，同时用硼酸溶液收集，再用硫酸滴定液滴定，以氮的量计算供试品的含量。

三、测定步骤

（一）消化（或破坏）

1.消化原理

将一定量的样品与浓硫酸共热，则有机物中的碳和氢被浓硫酸氧化成CO2和H2O，而氮则转变成NH3；H2SO4被还原为SO2和H2O。生成的CO2、SO2和H2O由溶液中逸去，而NH3则与过量的H2SO4结合成NH4HSO4或(NH4)2SO4保留在溶液中。

为了使有机物的破坏能迅速完全，通常采用升高温度和加入催化剂两种办法。在增高温度方面常加入不易挥发的无水碱金属硫酸盐（K2SO4或Na2SO4）以提高浓硫酸的沸点，阻止高温下浓硫酸的分解。在催化剂方面，常加入少量CuSO4（无水）、HgO、CuO、Se、H2SeO3等催化剂，其中以CuSO4最常用。

2.消化操作要求

（1）将供试品放入凯氏烧瓶中时，注意勿使供试品粘着瓶颈，如已沾着瓶颈，可在缓缓加硫酸时，用硫酸冲入。

（2）破坏时有部分硫酸蒸发及分解出有毒气体，故须在毒气柜中进行，以免中毒。

（3）使凯氏烧瓶成45o斜置，可防止在加热过程中供试品液飞溅的损失，防止瓶外的杂质掉入瓶内。

（4）切勿将烧瓶口朝向自己或他人，以防加热炮沸时溅出伤人。

（5）在凯氏烧瓶口放一小漏斗，有回流冷凝的作用，防止硫酸的挥发。

（6）开始加热时，应用直火缓缓加热，使溶液的温度保持在沸点以下，防止突然高温时，造成泡沫冲出而遭损失。

（7）等泡沸停止，强热至沸腾，俟溶液成澄明的绿色后，除另有规定外，继续加热至规定时间，放冷。

（8）有必要时（如瓶壁上部有黑色残渣），可轻轻转动或摇动烧瓶，时供试品能充分与硫酸接触，以保证破坏完全。

（二）蒸馏

1.蒸馏原理

于消化后已冷却的NH4HSO4或(NH4)2SO4溶液中，加入浓NaOH溶液并加热，可使NH3再游离出来。

NH4HSO4+NaOH→NH3↑+NaHSO4+H2O

Δ

或 (NH4)2SO4+2NaOH→2NH3↑+Na2SO4+2H2O

Δ

一般采用通入水蒸气加热的办法使NH3逸出，将逸出的NH3吸收在H3BO3溶液中。

NH3+H3BO3→NH4BO2+H2O

2.蒸馏操作要求

（1）破坏完成以后的溶液，放冷有白色固体析出，于尚未完全凝固时，缓缓加适量纯化水溶解，放冷至室温。

（2）在碱化前，先将蒸馏装置清洗好，安装好，并检查不得漏气。若用水蒸气蒸馏时，蒸汽发生器已沸腾。

（3）冷凝管的尖端应插入吸收液面下2/3处，使吸收完全，防止倒吸现象。

（4）将足够量的氢氧化钠溶液注意使沿瓶壁缓缓流至瓶底，自成一液层，以减少酸碱作用范围，待全部装置妥善后，再使其与酸液混合，否则会因强酸强碱中和时产生大量的热而使氨逸出损失。

（5）在常量法直接蒸时，加锌粒是为防止过热后出现爆沸，为止爆剂，但必须在加入碱液后，再加入锌粒，以免锌粒与硫酸作用而很快消耗掉。

（6）在半微量法中，在发生水蒸气的圆底烧瓶中加甲基红指示液数滴，加稀硫酸使成酸性，是为防止水中含有氨等挥发性碱性物质随水蒸气带入蒸馏器中，从而进入吸收液影响结果。注意一定不能使用盐酸等挥发性酸调酸性，防止挥发性酸进入蒸馏器内中和碱液，或进入吸收液影响结果。

（7）安装时，圆底烧瓶的蒸气出口应低于蒸馏器的蒸气入口，使蒸气带起的小水滴再回流到圆底烧瓶中，防止进入蒸馏器的夹层中降低蒸馏温度。

（8）圆底烧瓶中加玻璃珠或沸石数粒，以防止产生爆沸现象。

（9）蒸馏开始不可太快，以免蒸出的氨未及吸收而逸失。

（10）加热的火力应稳定，不能忽大忽小，否则会发生倒吸现象。

（11）蒸馏至规定接受体积时，先将冷凝管尖端提出液面，使蒸气冲洗约1分钟，用水淋洗尖端后，再停止蒸馏。

（12）本法应同时作空白试验，并将滴定的结果用空白试验校正。

（三）滴定

然后用硫酸滴定液直接滴定，其反应式为：

2NH4BO2+H2SO4+2H2O→(NH4)2SO4+2H3BO3

在这里H3BO3起着固定氨的作用。由于H3BO3的酸性极弱，它的存在并不干扰滴定。

四、不需有机破坏的含氮药物

某些含氮药物（如吡拉西坦中含有酰胺结构），可直接加入氢氧化钠，加热水解生成低级胺、氨，蒸馏出来，用硼酸溶液吸收，以硫酸滴定液滴定。

五、注意事项

1.供试品取量应适宜，常量法约相当于含氮量25～30mg，半微量法约相当于含氮量1～2mg，供试品取量太多或太少，都将影响测定结果。

2.取用的供试品如在0.1g以上时，应适当增加硫酸的用量，使消解作用完全，并相应地增加40%氢氧化钠溶液的用量。

3.样品裂解时，用直火加热时间不可过长，加入硫酸盐的量不可过多，以防硫酸铵分解。

4.因强酸、强碱中和时会发生大量的热，使氨逸出损失。中和时应沿器壁缓慢地加入足够的碱液，使酸液和碱液分成两液层。全部装置安装好后再混合。

5.蒸馏时加入锌粒或沸石为助沸止爆剂，防止强碱过热后产生爆沸。

6.冷凝管的尖端应插入吸收液面下2/3处，使吸收完全，防止倒吸现象。

7.蒸馏开始不可太快，以免蒸出的氨未及吸收而逸失。

8.蒸馏结束时，先将冷凝管尖端提出液面，以免液体回吸。

六、使用范围

有机含氮化合物都可用本法测其含量。根据含氮量的高低可分为常量法和半微量法。

七、允许差

本法的相对偏差不得超过1%。

氧化还原滴定法

亚硝酸钠在盐酸存在条件下与具有芳伯氨基化合物发生重氮化反应，定量生成重氮盐。

滴定条件：

(1) 过量盐酸：加快反应速度，重氮盐在酸性条件下稳定，防止偶氮化合物形成；酸度过高会阻碍芳伯氨基游离

(2) 室温(℃～30℃)条件：温度过高使亚硝酸逸失，过低反应速度太慢

(3) 滴定时加入kbr作为催化剂

(4) 滴定方式：开始时滴定管尖端插入液面下，在搅拌下迅速加入，避免亚硝酸损失。近终点时滴定管提出液面，淋洗、缓慢滴定。

(5) 终点指示法：永停滴定法

亚硝酸钠滴定液使用基准对氨基苯磺酸标定。