词条 | 氯霉素检测 |
释义 | 氯霉素检测 目前的氯霉素等抗生素快速检测,主要有酶联免疫法(ELISA)和胶体金免疫层析法。 胶体金法的特点是快速、简单,无需实验室器材和专业的操作人员,前处理简单,结果直观,常温保存。国内有很多优秀的厂家均有生产,比如上海快灵,北京六角体等。现已广泛应用于国内各大企业。 胶体金法只需将处理好的样品加入稀释液,搅拌均匀,将混合好的检测液滴入检测卡中,5~10分钟即可根据卡上的出线情况判读结果。 ELISA法反应原理 主要是利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的基本原理来进行的。在整个反应当中,样品中氯霉素含量越多,反应呈色就越淡。反之,样品中氯霉素含量越少,则呈色越深。 试剂盒组成 1、微量测试孔:每条8孔,每板12条 2、氯霉素标准溶液: 0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35 ppb、4.05 ppb,1.5ml/瓶 3、10倍浓缩萃取稀释液:一瓶,30ml/瓶 4、10倍浓缩洗涤液:一瓶,30 ml /瓶 5、氯霉素酶标记物: 一瓶,8 ml/瓶 6、底物溶液:一瓶,12 ml/瓶 7、反应终止液:一瓶,13 ml/瓶 使用说明 A、注意事项 1、使用前先将氯霉素标准溶液6瓶,浓缩萃取稀释液,浓缩洗涤液,酶标记物,底物溶液及微量测试孔条置于室温下,回温30分钟。 2、原倍萃取稀释液及洗涤液配制 用蒸馏水将10倍浓缩萃取稀释液及浓缩洗涤液分别以1: 9的比例稀释(即1mL浓缩液+9mL蒸馏水),即可作为样品萃取稀释液与微孔板清洗液。 3、回温后,取出所需微量测试孔条,将剩余板条立即放回铝箔袋中用胶带封好,置于4o℃保存。 B、样品制备 1.待测物为生乳,则依以下方法进行处理 (5倍稀释) 取100ul待测生乳加入400ul萃取稀释液,振荡混合后备用。 2.待测物为蜂蜜,则依以下方法进行处理 a.取2g蜂蜜、4ml蒸馏水与2ml 乙酸乙酯置入离心管中,震荡约5分钟,使其充分混合均匀。 b.离心10分钟(3000rpm),取0.5ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50℃下氮气吹干(温度请勿超过50oC)。 c.加入0.5ml萃取稀释液,震荡约10秒钟后备用。 3. 待测物为血清、则依以下方法进行处理 a.抽取待检动物血液,离心或静置取其较透明之上层液(血清层)使用,注意不要有溶血。 b.将3ml血清加入离心管中,再加入6ml乙酸乙酯,震荡混合约30秒。 c.离心10分钟(3000rpm),取2ml上层液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50oC下氮气吹干。 d.于此玻璃管中加入正己烷2ml,先将残余物完全溶解后,再加入1 ml萃取稀释液,震荡约30秒钟。 e. 离心10分钟(3000 rpm),用吸管吸去上层液(正己烷) 及中间乳化层部分,弃掉。再吸取下层液(水层)备用。 f.若有乳化现象,请先将大部分上层液(正己烷)取出后,再将玻璃管置入80oC水中,隔水加热约5~10分钟,可改善乳化情形。 4. 待测物为鸡肉或鱼、虾,则依以下方法进行处理 a.将3克样品剪碎后放入50 ml离心管中,再加入6ml乙酸乙酯,并以均质机均质约1分钟,再震荡约30秒。 b.离心10分钟(3000rpm),取2ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50oC下氮气吹干。 c.于此玻璃管中加入正己烷2 ml,先将残余物完全溶解后(若未能完全溶解,可能会导致回收率降低),再加入1 ml萃取稀释液,震荡约30秒钟。 d.离心10分钟(3000 rpm),用吸管吸去上层液(正己烷) 及中间乳化层部分,弃掉。再吸取下层液(水层)备用。 e.若有乳化现象,请先将大部分上层液(正己烷)取出后,再将玻璃管置入80oC水中,隔水加热约5~10分钟,可改善乳化情形。待测物为血清、则依以下方法进行处理 5.待测物为内脏(肝、心等),则依以下方法进行处理(5倍稀释) 同上述步骤a~d,但下层液吸出后,再以萃取稀释液稀释5倍(即下层液50ul加萃取稀释液200ml)。 6.待测物为饲料,则依以下方法进行处理(10倍稀释) 同上述步骤a~d,但下层液吸出后,再以萃取稀释液稀释10倍(即下层液30ul加萃取稀释液270ml)。 C、操作步骤 本产品的酶标记物与氯霉素标准溶液均直接使用,无需再稀释。 1、于适当微孔中分别加入100mL标准溶液(0,0.05,0.15,0.45,1.35和4.05ppb)。 2、在另外的微孔中加入100mL 已完成前处理的样品溶液。 3、再于每一微孔中另再加入50mL酶标记物。 4、轻敲盘子四周,使其充分混合后于室温下避光静置温育1小时。 5、将微孔中的反应液甩掉,再将洗液加满每一微孔后甩掉,重复洗3次。 6、最后一次甩掉后,在吸水纸上拍干。 7、于每一微孔中加入底物溶液100mL后,轻敲盘子四周,使其充分混合。 8、于室温下避光静置温育20分钟。 9、于每一微孔中加入100mL反应终止液。 10、用酶标仪于波长450nm下判读。 D、判定 1. 计算B/B0值。用样品或标准液吸光度值(B)除以零标准吸光度值(B0)再乘以100%。 2. 以B/B0值为纵坐标,以标样浓度的对数值为横坐标,做标准半对数曲线。 3. 根据每个样品的B/B0值就可从曲线上读出相对应样品的浓度。 4. 由于样品经过了预先稀释,因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。 E、标准曲线 F、灵敏度 氯霉素试剂检测盒的平均检测下限为 0.05ppb,此浓度之吸光值与阴性标准溶液(0ppb)之吸光值有明显的差异。 G、 特异性 针对以下抗生素进行交叉反应之测试,结果如下: Chloramphenicol =100% Chloramphenicol(free base) <0.1% Gentamycin <0.1% Tetracycline <0.1% Penicillin G <0.1% Sulfamethazine <0.1% H、再现性 针对氯霉素检测试剂盒精密度测试,重复6次,所得不同浓度标准溶液的吸光值变异系数(%CV). I、回收率 生乳(添加1.0ppb)104~117% 蜂蜜(添加0.3ppb)90~110% 虾及鱼肉(添加0.5ppb)95~110% 鸡肉(添加0.5ppb) 90~120% 血清(添加0.5ppb)100~120% 内脏(添加1.0ppb) 100~120% 饲料(添加2.0ppb)80~110% 氯霉素检测试剂盒 简介 氯霉素(Chloramphenicol)是一种广谱抗生素。由于其具有效果好以及价格低廉等优点,目前已被普遍应用于各类家禽、家畜、水产品及蜂制品的各种传染性疾病的治疗。然而氯霉素有其严重的副作用,它会抑制人体骨髓的造血功能,从而引起再生障碍性贫血和粒细胞缺乏症。目前,我国已禁止其使用。 简化了样品处理方式,使用简便,省时省力省钱,整个操作过程不到90分钟。本产品检测范围广(鸡肉、鱼、虾、蟹、牛奶、血清、肌肉、组织、饲料与蜂蜜等),回收率为80%-120%,灵敏度可达到0.05ppb. 简单 1. 样品提取方便快捷。 2. 90分钟得到结果。 3. 只需基本的实验室设备。 4. 操作人员只需最基本的实验知识。 准确 1. 结果重现性高。 2. 精确至0.05ppb。 3. 与其它抗体的交叉反应率极低。 产品规格 包装:每包96孔 灵敏度: 0.05ppb 测试区间:0.05ppb-4.05ppb 检测时间:80分钟(提取后) 储存条件:2-8℃ 氯霉素快速检测试纸(48条/盒) 型号:DP1 氯霉素(Chloramphenicol)是一种广谱抗生素。由于其具有效果好以及价格低廉等优点,目前已被普遍应用于各类家禽、家畜、水产品及蜂制品的各种传染性疾病的治疗。然而氯霉素有其严重的副作用,它会抑制人体骨髓的造血功能,从而引起再生障碍性贫血和粒细胞缺乏症。目前,我国已禁止其使用。 氯霉素检测试纸,简化了样品处理方式,使用简便,,整个操作过程只须15分钟。灵敏度可达到3ppb 其原理为:在试剂片的 ‘中央判读区’喷有2条隐形的线,上面一条为对照线(C线),下面一条为测试线(T线)。若样品中氯霉素的浓度小于3ppb,则T线呈色与C线相近;若样品中氯霉素的浓度大于3ppb,则T线将比C线浅很多或完全看不到线,也就是说,氯霉素浓度越高T线越浅。 简单: 1. 成套的装置,提供准确一致的可视的结果 2. 适于现场检测。15分钟得到结果。 3. 操作人员只需最基本的化验知识。 准确: 1. 结果重现性高。 2. 精确至3ppb。 3. 与其它抗体的交叉反应率极低 技术支持: 我们为用户提供最方便、快捷、周到的服务。 产品规格 包装:每包16片 灵敏度: 3ppb 检测时间:15分钟(提取后) 储存条件:2-8℃ 组成 本试纸组可进行16次实验 1、反应孔:2条16孔 2、氯霉素指示剂:1瓶 3、检测试纸片一筒 :16片 4、小吸管:24支 5、样品混合棒:20根 6、10倍浓缩稀释缓冲液:1瓶 试纸使用说明: A、注意事项 1、 试纸需要干燥保存,请随时确保瓶盖盖严 2、 测试环境温度>20℃即可。 3、尽量不要触摸试纸片中央在白色膜面。 4、本试纸使用前,需先将整套组成部分在室温中回温30分钟,以确保反应的正确性。 5、检测一个样品使用一个反应孔,一片测试片及一支滴管。未用完的氯霉素指示剂,可放回4℃冰箱留待下次再用。未用过的微量测试孔,隔次仍可使用。 6、结块或发臭的牛奶不适合检测。 7、原倍稀释缓冲液配制:用蒸馏水将10倍浓缩稀释缓冲液以1:9的比例稀释(即1mL浓缩液+9mL蒸馏水),即可作为样品稀释液。 B、样品制备: 1.待测物为牛奶可直接进行检测。 2.待测物为蜂蜜,则依以下方法进行处理: 以金属勺取少量待测蜂蜜样品置于火上加热至沸腾,用小细管趁热吸取样品(勿吸入气泡),以稀释缓冲液做1:3稀释。 3. 待测物为血清、则依以下方法进行处理: a.抽取待验动物血液,离心或静置取其较透明之上层液(血清层)使用,注意不要有溶血。 b将3ml血清加入离心管中,再加入6 ml乙酸乙酯,震荡混合约30秒。 c.离心10分钟(3000rpm),取2ml上层液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50oC下氮气吹干。 d.于此玻璃管中加入正己烷2ml,先将残余物完全溶解后,再加入1 ml 稀释缓冲液,震荡约30秒钟。 e. 离心10分钟(3000 rpm),用吸管吸去上层液(正己烷) 及中间乳化层部分,弃掉。再吸取下层液(水层)备用。 f.若有乳化现象,请先将大部分上层液(正己烷)取出后,再将玻璃管置入80oC水中,隔水加热约5~10分钟,可改善乳化情形。 4. 待测物为鸡肉或鱼、虾,则依以下方法进行处理: a.将3克样品剪碎后放入50 ml离心管中,再加入6 ml乙酸乙酯,并以均质机均质约1分钟,再震荡约30秒。 b.离心10分钟(3000rpm),取2ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50oC下氮气吹干。 c.于此玻璃管中加入正己烷2ml,先将残余物完全溶解后(若未能完全溶解,可能会导致回收率降低),再加入1ml稀释缓冲液,震荡约30秒钟。 d.离心10分钟(3000 rpm),用吸管吸去上层液(正己烷) 及中间乳化层部分,弃掉。再吸取下层液(水层)备用。 e.若有乳化现象,请先将大部分上层液(正己烷)取出后,再将玻璃管置入80oC水中,隔水加热约5~10分钟,可改善乳化情形。 5.待测物为内脏(肝、心等),则依以下方法进行处理(5倍稀释): 同上述步骤a~d,但下层液吸出后,再以稀释缓冲液稀释5倍(即下层液100μl加 稀释 缓冲液400ul)。 6.待测物为饲料,则依以下方法进行处理(10倍稀释): 同上述步骤a~d,但下层液吸出后,再以稀释缓冲液稀释10倍(即下层液100μl加 稀释 缓冲液900ul)。 C、操作步骤: (若样品不只一份,请先为样品及反应孔做好对应编号) 1.以小吸管在微量测试孔中依次加入两滴待测的样品(以小吸管吸取时,须将第一滴滴除后,再进行实验步骤)。 2.充分摇匀氯霉素指示剂,以新的滴管吸取氯霉素指示剂,滴去前两滴,加入一滴指示剂于待测样品的测试孔。 3.以手轻轻握住微孔,贴着桌面震荡使其混合均匀约5分钟。 4.于每个测试孔中放入试纸片(白色端在下)。 5.静置10分钟后判读结果(判读结果时间不要超过20分钟)。 D、判读: (由于样品经过了预先稀释,因此所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数) 情形1—T线比C线深,或一样深,表示样品中氯霉素浓度低于3ppb。 情形2—T线比C线淡,表示样品中氯霉素浓度高于3ppb。 情形3—若C线完全没出现,则表示测试失败。 |
随便看 |
百科全书收录4421916条中文百科知识,基本涵盖了大多数领域的百科知识,是一部内容开放、自由的电子版百科全书。