| 词条 | 激素测定法 |
| 释义 | § 激素测定法 § 正文 对体液或组织中激素含量的测定方法。按照世界卫生组织分类原则，可把激素测定方法分为生物鉴定，化学测定，蛋白结合测定和细胞化学测定4类。 生物鉴定 以样品中所含激素引起动物的某些特异生物反应为基础的测定方法。是20世纪20年代发展起来的。例如，胰岛素降低血糖；雄激素引起阉鸡鸡冠生长；雌激素使啮齿类动物阴道上皮角质化；甲状腺激素可以促进蝌蚪变态等。生物鉴定有两个特点:①活体注射;②以生物反应作为鉴定指标。因此，对鉴定条件的严格控制十分重要。如给药途径、注射剂量、溶剂和悬浮液的性质，动物种类、年龄、性别和健康状况等。此外，所选终点反应指标应为特异反应。如肾上腺素能升高血糖，但不能依此指标来鉴定肾上腺素。因为胰高血糖素、促肾上腺皮质素、肾上腺皮质激素也可通过不同作用途径引起血糖上升。此外，各种激素在体内的反应可能是多途径的;不同动物对同一激素的反应也可能有所不同。由于这些复杂情况在选择生物鉴定的最终反应指标时，必须要考虑其客观性、精确性、灵敏性、特异性、重复性和方便性。测定技术应立足于仪器的客观测定，而不是依赖于主观估计。如性甾体激素能改变人的体型和毛发分布，但这些指标难以客观测定。 生物鉴定的优点是反应特异的生物活性，能真正代表激素的生物效应，所以它是一切测定方法的基础。生物鉴定的缺点是灵敏性差；动物用量大；实验延续时间长，难以鉴定多量样品。 化学测定 20世纪40年代随着化学技术的发展，对一些小分子激素（如甾体激素）的分子结构以及它们的代谢产物有了比较明确的了解，在此基础上发展起来的以激素或代谢产物分子上的特异基团同某种试剂的显色反应为基础的测定方法。它只能测定一些小分子化合物，灵敏度比生物鉴定高但操作程序复杂，使用不普遍。 蛋白结合测定 目前最通用的一种激素测定方法，也是命名最混乱的一种测定方法。通常用的免疫测定法，放射免疫测定法，受体结合测定法和血浆蛋白结合测定法，都属于这一类测定方法。世界卫生组织根据其测定原理对蛋白结合测定法提出新的分类标准和统一命名。这些分类标准包括：①在测定中是否需要标记物；②标记的是被测物还是结合蛋白；③在测定系统中被测物过量还是结合蛋白过量；④测定的是被测物本身(直接法)还是结合蛋白（间接法）；⑤在测定系统中是否需要分离步骤。 据上述标准，以免疫测定为例，介绍几种测定方法： 不用标记物的蛋白结合测定法──免疫测定法 基于被测物（抗原）与其特异结合蛋白（抗体）结合时所出现的沉淀线作为测定指标的，在测定系统中加入的抗体是过量的。操作较为迅速和方便。但这一测定法只适应于测定大分子物质，被测物的浓度较高，只有这样才形成能用肉眼看到的抗原-抗体复合物,这类方法应用较少。 标记抗原的免疫测定法──放射免疫测定法 这是以标记抗原和未标记抗原与同一抗体的竞争性结合反应为基础的(图1)。一般用下面的公式表示： 从这个反应中可知，随着未标记抗原增加，在反应系统中复合物中标记的抗原越来越少，因而在仪器上所测到的放射性记数也越来越少，由此可以作出一条标准曲线，并从标准曲线上查出被测样品的含量。放射免疫测定法既能测定蛋白质类的大分子物质，也能测定半抗原一类的小分子物质。放射免疫测定法的灵敏度高，样品用量少，并便于自动化操作。放射免疫测定法属结合蛋白（抗体）限量测定，标记的是被测物（抗原），所以它属于直接测定。 标记抗体的免疫测定──免疫放射计量测定法 这是标记特异抗体。在反应系统中加入过量的标记抗体以便使全部被测抗原与之结合，然后，将结合和未结合的抗体分开。用吸附剂除去未结合的抗体，因此最后在仪器上测到的是结合型的抗体,这是一种间接测定,并且是一种过量蛋白结合试剂测定法。它与放射免疫测定法有本质上的区别。过量蛋白结合试剂测定法反应迅速，反应更为灵敏，但特异性较差。为了克服这一不足，有人发展了一种夹心面包免疫放射计量测定法，大大提高了特异性和灵敏度(图2)。 激素测定法 非同位素标记的免疫测定 除用同位素作标记物之外，还有许多化合物可用作标记物。如酶、荧光素、病毒、金属、红细胞、乳酸和其他许多特异显色颗粒。非同位素免疫测定的命名可按放射免疫命名的格式来表示。如：放射免疫测定、酶免疫测定、荧光免疫测定和病毒免疫测定等。 用非同位素标记抗体的免疫计量测定，也可仿照免疫放射计量测定法的命名来表示。如：免疫酶计量测定；免疫荧光计量测定。 以上仅仅以抗体作为结合试剂为例命名，对以其他结合蛋白为结合试剂相似的测定，也可以同样格式命名。 不经分离步骤的免疫测定法──猝灭测定 差不多所有标记测定法都需要一种适当的分离步骤，以便把反应系统中最终的结合型和游离型标记物分开进行测定。但是分离步骤会导致偏差，影响测定结果。有些分离技术需要熟练的技巧。猝灭型测定法一般用于测定半抗原化合物。其基本原理是，先将标记物──酶与半抗原分子结合，当抗原同酶结合后在空间构型上发生变化，此抗原与抗体结合后其酶不再同底物发生作用，酶的活性失效（或称作猝灭）。 细胞化学测定 放射免疫测定法虽然灵敏度高，操作方便，但所测结果不能完全代表激素的生物活性，因为激素分子的免疫活性中心和生物活性中心往往是不一致的。近年有人发展了一种细胞化学测定方法，大大推进了测定技术的发展。 许多激素在其靶细胞中，可直接或间接引起一系列氧化还原反应，不同剂量的激素在靶细胞中所引起的反应程度（或状态），可以通过某种组织化学和细胞化学方法（对特异酶或反应底物的显色反应）显示出不同程度的染色，这些染色反应可通过非常灵敏的仪器（微光密度测定仪）定量地记录下来，这就是细胞化学测定法的基本原理。 细胞化学测定,实际上是一种生物测定法，但是,它兼有放射免疫测定法和生物测定法的双重优点，其灵敏度比放射免疫测定法高500～1000倍。血液样品可作 1:100或1:1000稀释,每次测定血液用量极微。在测定技术上，现已开始用组织切片来代替组织块，大大提高了测定效率。此方法的缺点是延续时间长，并要用贵重仪器和消耗大量干冰，所以难以推广。 § 配图 § 相关连接 |
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