苯异硫氰酸酯（PITC）在pH9.0的碱性条件下对蛋白质或多肽进行处理，PITC与肽链的N-端的氨基酸残基反应，形成苯氨基硫甲酰（PTC）衍生物，即PTC-肽。然后PTC-肽用三氟乙酸处理，N-端氨基酸残基肽键被有选择地切断，释放出该氨基酸残基的噻唑啉酮苯胺衍生物。接下来将该衍生物用有机溶剂（例如氯丁烷）从反应液中萃取出来，而去掉了一个N-端氨基酸残基的肽仍留在溶液中。萃取出来的噻唑啉酮苯胺衍生物不稳定，经酸作用，再进一步环化，形成一个稳定的苯乙内酰硫脲（PTH）衍生物，即PTH-氨基酸。

优点：①可与一级和二级氨基酸同时反应；②衍生产物单一、稳定，冻干的衍生物一20℃可贮存1个月，4℃水溶液中可贮存3 d，而色谱响应值无明显变化；③分析时间短，测定水解氨基酸仅需12 min。

缺点：①样品的制备较为繁琐，需预先去除剩余试剂，而且虽然严格操作，但存在于样品中的痕量PITC试剂也会缩短分析柱的寿命；②胱氨酸的线性不好，实践中此法不适用于游离胱氨酸的测定；③由于只能使用紫外检测，所以和使用荧光检测的方法相比，此法检测灵敏度较低。