主要内容

1、为什么需要测量OD600

3、OD600在行业中的应用

4、细菌细胞密度(OD600)测量时的注意事项

主要内容

为什么需要测量OD600 OD值的名词解释与测量方法的实现

OD600在行业中的应用

细菌细胞密度(OD600)测量时的注意事项

1、为什么需要测量OD600

实验室确定细菌生长密度和生长期，多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验，需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。OD600是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。以未加菌液的培养液作为空白液，之后定量培养后的含菌培养液。2、OD值的名词解释与测量方法的实现 2.1 OD值名词定义：OD是optical density（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度，是检测方法里的专有名词，检测单位用OD值表示，1OD=1og10（1/trans），其中trans为检测物的透光率T值。光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。从上面的定义可以看出，OD600指的是某种溶液在600nm波长处的吸光值。通过吸光值的定义可以知道，吸光值正比于溶液中的吸光物质的浓度，相应地与样品的透过率T值成反比，在数值上来说，它们之间是对数关系。

2.2 测量方法的实现：目前知道的测量原理就是用分光光度计来实现，包括可见和紫外分光光度计都可以，因为波长是在600nm，目前市面上所有的分光光度计都可以满足要求，但根据实验者对测量数据的精度和准确度的要求可以选择不同档次的光度计来实现。目前也有部分厂家的光度计直接支持OD600，例如天美的UV1100。如果是普通的分光光度计我们也可以实现OD600的测定，第一步在仪器的光度计模式中，先把波长走到600nm；第二步放入我们的空白样品，进行调零操作；第三部放入样品直接显示样品的T值（透过率值），之后带入OD值与T值的换算公式中可以得到OD600。个人感觉以后光度计可以直接增加测定OD值的功能，简单的办法就是在测量模式中直接加入OD选项，只需要简单的编程就可以。

3、OD600在行业中的应用

它的一个重要应用，就是利用细菌的吸光来测量细菌培养液的浓度，从而估计细菌的生长情况，所以通常用来指菌体细胞密度。 比如，测量细菌培养液在600nm处的吸光值，得到的OD600的数值如果在0.6-0.8之间，表明细菌处于旺盛生长的对数生长期，OD600>3表明细菌已经饱和等。细菌的生长情况,可以通过测OD600来监测。细菌的生长比较好的时期是在OD600为1时,此时可以进行转代等研究.在细菌的培养中,OD600超过0.8就要稀释培养液。

4、细菌细胞密度(OD600)测量时的注意事项

分光光度计要测量的样品必须是均一的溶液，不能有沉淀，如果有沉淀的话就要摇匀。为了保证正确操作，必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数，做出校正曲线。实验中偶尔会出现菌液的OD值出现负值，原因是采用了显色的培养基，即细菌培养一段时间后，与培养基反应，发生变色反应。另外，需要注意的是，测试的样品不能离心，保持细菌悬浮状态。注意，一般来说样品的吸光度值在0.1-1.5Abs之间可以保证仪器的准度和测量结果的先行关系。对于浓度过度的样品建议稀释后再进行测定。