即巢式PCR，是指利用两套PCR引物（巢式引物）对进行两轮PCR扩增反应。

在第一轮扩增中，外引物用以产生扩增产物，此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增。

由于巢式PCR反应有两次PCR扩增，从而降低了扩增多个靶位点的可能性（因为与两套引物都互补的模板很少）增加了检测的敏感性；又有两对PCR引物与检测模板的配对，增加了检测的可靠性。

一般应用于动物方面。如：病毒，梅毒螺旋体，HIV，肿瘤基因等