化学损毁技术

外科切除、电解、烧灼均为非选择性损毁法，后来发现特异性物，如蓖麻蛋白损毁周围神经、谷氨酸单钠选择性损毁正丘脑弓状核神经元，用3-乙酰吡啶选择性损毁下橄榄核神经元，鹅膏蕈氨酸损毁尾壳核的胆碱能神经元，6-OHDA损毁中枢CA神经元；5，6-和5，7-双羟色胺可作为5-HT化学切割剂。辣椒素对辣椒素敏感的C类神经元具有选择性破坏性作用。

6-OH原理：（！）其对轴膜上胺摄取机制中的载体有高度亲和力（2）其很易自我氧化形成毒性分子，如苯醌而引起神经溃变。实验表明轴突末梢最敏感，而胞体最不敏感。在CA能神经元中，对NE能神经元的作用又大于DA能和肾上腺素能神经元。经6-OHDA作用的NE能神经元，可产生半永久性的损毁。

6-OHDA只有达到阈浓度（50-100mmol/L）才有神经毒性，低于此浓度可被神经元报取作为假递质。末梢给予6-OHDA 1-4h后即有超微结构的改变，1-2h即有荧光组化的改变，轴突末梢荧光消失。若脑室注射，需数天才可。由于6-OHDA不能透过BBB，故只有脑内注射才可引起CA神经元的溃变。其中蓝斑最敏感，外侧被盖NA最不敏感。黑质---纹状体敏感，中枢肾上腺能神经对6-OHDA不敏感。

交感神经切除术与轴突切除术之6-OHDA溶液制备方法相同，注射剂量也相同（100mg/kg）。新生小鼠出生后24h开始ip，每日一次，共10天。小鼠精心喂养观察。当出生后24h同窝小鼠开始注射，注射容量开始时0.02ml，随体重比例性增加可至0.1ml。应适度调节6-OHDA浓度，以保持剂量的恒定。注意一月龄时断奶分笼饲养。在最后一次6-OHDA处理后7-10周进行实验。大鼠脑室注射浓度一般为20-50μl( 200μg).纹状体中注射6-OHDA制成PD模型，药物配制方法：6-OHDA10μg，溶于5μl含质量分数为0.2%抗坏血酸的生理盐水中，注入纹状体，注射速度为0.5μl/min，注毕留针5min，并以1mm/min速度缓慢退出。

6-OHDA选择性高，对胆碱能神经和5-HT神经元几乎无作用，但在中枢有一定的非特异性摄取，因而在中枢应用6-OHDA时，为防止5-HT神经元的摄取，往往先ip注射去甲丙咪嗪（desimipramine），以抑制5-HT神经末梢对6-OHDA的摄取，保护5-HT神经元不受6-OHDA的损害。而外周应用多不必注射丙咪嗪，可能与外周神经分布有关。

如：（伦学庆，章翔，张剑宁，等。中国病理生理杂志 1999；15（2）：188-190）注：为什么用Vit C配制，调节pH值？

相关文献：Angeletti PY, R Levi-Montalcini. Sympathetic nerve cell destruction in newborn mammals by 6-hydroxy-dopamine, Proc. Natle Acad Sci, 1970,65:114

对5-HT神经元。5，6-DHT和5，7-DHT可在5-HT神经元中选择性积聚，并自身氧化成毒性物质。而PCAM对上行性5-HT作用强，机制不明。但5，6-HT和5，7-HT不能透过BBB，但PCAM（氯苯丙氨，or pCPA）可以，故可作腹腔注射。一般5，6-DHT 75μg，i.c.v，可使脊髓中5-HT含量降低85%左右。若选择性损伤脑中5-HT，可小剂量5，6-DHT注入中脑被盖的腹 内侧以损毁5-HT上行纤维，该法使前脑5-HT含量降低70%-80%，而延桥脑和脊髓不受影响。，但缺点是前脑DA含量发生一过性下降（下降30%，5d恢复），NA含量则升高50%。若用5，7-DHT，毒性小，剂量可增加一倍，大鼠 150μg，i.c.v可使脊髓5-HT含量下降90%以上，前脑、脑干分别下降80%和60%，缺点是对NA纤维也有较强的亲和力，使脑内NA下降50%，54d尚未恢复。一般5，6-DHT注射1-3d后，5-HT纤维及其末梢被破坏，接近末梢处的轴突变粗，直径可达3-15μm，有大量橙、黄或棕色荧光物质堆积，据此可追踪 5-HT纤维走行。而pCPA给大鼠腹腔注射300mg/kg，或每日100mg/kg，连续3d，可使脑内5-HT含量下降80-90%，给药2-3d达归低点，1w后开始恢复，2w后基本恢复。由于其只抑制TPH，不抑制5-HTPDC，从而注射后可重新恢复，使之成为理想的工具药。但不足的是其对酪氨酸羟化酶（TH）也有轻度抑制作用。注射后1-6d内，脑NA含量下降10%-20%。另外还有对氯苯丙氨（PCA），可使脑内5-HT下降60%达4月之久，但其降低幅度低，且作用环节复杂，非理想工具药。

免疫交感神经切除术

NGF是感觉和外周神经元是一种特异性神经营养因子。一般认为NGF-7S含有5个亚单位（2α、1β、2γ），仅β亚单位具有神经营养活性。NGF-2.5S实质即是NGF-7S的β亚单位。

一般交感神经切除方法有：药物性切除、手术性切除和免疫性切除。但手术一般很难切除完全，药物阻断，往往药效不单一，具有多种药理作用。而免疫切除指采用神经营养因子抗血清进行注射。

新生的大鼠或小鼠，在生后24-48h，将NGF抗血清（效价在1/1000~1/2000），按0.05ml/g体重剂量皮下注射，每日一次，连续注射1~2周（应有对照组）。新生鼠长至2~3月龄时，组织学检查交感神经几乎是永久性破坏。但其体重体温、活动、饮食、生育能力完全正常。在麻醉下心率约400次/分，与正常大鼠一致。平均静止血压为70mmHg，低于正常大鼠100mmHg。刺激右迷走神经外周端，与正常组动物比较，二者心率都显著减慢，但对注射NA或肾上腺素的升压作用较正常动物强三倍。表明它们对CA的作用具有较大的延长。而且通过这样处理过的大鼠交感神经几乎完全失去，即使残存，也比对照组动物放电的电位幅显著降低。免疫切除交感神经的大鼠心脾肺内的NA含量显著减少，但CNS内未见显著变化，中枢神经系统内也未见任何形态变化。可见这是一种较理想的交感神经切除方法。

但要注意一些点：（1）新生鼠皮下脂肪太薄，注射NGF抗血清易从针孔处漏出，为防止漏出，所以一定要慢。（2）成年动物应用抗血清，其作用要小得多。对成年小鼠重复应用NGF抗血清，直到一个月，仅引起交感神经切的中度萎缩（约40%），故NGF抗血清应应用于新生鼠。（3）应注意是何种抗血清，应分清种属之间的差异。如Sigma采用的是兔抗鼠NGF血清。