概念

药物分析

概念

核苷类是具有广泛生理活性的一类水溶性成分，余竞光等从薄盖灵芝菌丝体中分离得到五种核苷类化学成分，其中灵芝嘌呤是新化合物。Shimiz等人从赤芝子实体中也得到四种核苷类化合物。灵芝中核苷类化合物的提取方法一般是将灵芝菌丝体乙醇提取物浓缩后溶于水，依次以乙醚、乙酸乙酯萃取，萃 取后的水溶液通过阳离子树脂处理，流出的溶液及水洗液通过大孔树脂色谱，得到尿嘧啶核苷、尿嘧啶。交换后的阳离子树脂用NH4OH处理，依次用乙醇、水洗脱。95%乙醇洗脱部分经硅胶柱色谱及制备薄层色谱得到腺嘌呤、腺嘌呤核苷和灵芝嘌呤等。这几种核苷类的结构如下：

由赤芝孢子粉和薄盖灵芝菌丝体制成的增肌注射液在临床上广泛应用于进行性肌营养不良，萎缩性肌强直等疾病的治疗，并有较好的疗效。动物实验证明尿嘧啶和尿嘧啶核苷对实验性肌强直症小鼠血清醛缩酶有降低作用。SHimizu等人发现腺嘌呤核苷有很强的抑制血小板凝集血小板凝聚的作用和镇静、抗缺氧及促进心肌组织摄取86Rb的作用。

药物分析

方法名称： 四维灵芝液—核苷类成分的测定—高效毛细管电泳法

应用范围： 本方法采用高效毛细管电泳法测定四维灵芝液中的核苷类成分腺苷及鸟苷的含量。

本方法适用于四维灵芝液。

方法原理： 取供试品，离心取上清液，加于于处理好的大孔吸附树脂上，依次以水、30%乙醇洗脱，收集30%乙醇部分，水浴上蒸干，残渣以水溶解定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，滤液作为供试品溶液，注入高效毛细管电泳仪进行电泳分离，用紫外检测器检测腺苷及鸟苷的相应值，计算其含量。

试剂： 1.乙醇

2 .硼砂

3. 十二烷基磺酸钠（SDS）

仪器设备： 1 仪器

1.1 高效毛细管电泳仪

1.2 熔融石英毛细管柱（75μm×57cm，有效柱长50cm）

1.3紫外检测器

2 分离条件

2.1 运行缓冲液：20nmol/L硼砂（含30mmol/LSDS，pH 10.0） 95%乙醇 = 95 5

2.2 气动进样：20psi, 15s

2.3 柱温：20℃

2.4 检测波长：254nm

试样制备： 1.称取供试品

精密量取四维灵芝液20mL。

2. 对照品储备溶液的制备

精密称取腺苷及鸟苷适量，用水为溶剂配制成浓度为0.1mg/L的对照品储备溶液。

3. 内标溶液的制备

精密称取内标磺胺甲恶唑适量，用水为溶剂配制成浓度为0.2mg/L的内标溶液

4. 标准溶液的制备

精密吸取对照品储备溶液各0.1、0.3、0.5、0.7、1.0、2.0mL，置于5mL量瓶中，各加入内标1mL，加水至刻度，摇匀，得系列浓度的标准溶液。

5.供试品溶液的制备

取供试品，离心取上清液，加于于处理好的大孔吸附树脂小柱（1.5×11cm）上，依次以水50mL、30%乙醇100mL洗脱，收集30%乙醇部分，水浴上蒸干，残渣以水溶解定量转移至5mL量瓶中，加内标液1mL，加水至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，滤液作为供试品溶液，

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤： 1. 标准曲线的绘制

上述系列浓度标准溶液分别注入高效毛细管电泳仪进行电泳分离，以紫外检测器检测，检测波长为254nm，将腺苷及鸟苷的浓度对其峰面积与内标峰面积比绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程。

2. 供试品的测定

上述供试品溶液注入高效毛细管电泳仪进行电泳分离，以紫外检测器检测，检测波长为254nm，记录腺苷及鸟苷的相应值，计算其含量。