词条 | 福尔根反应 |
释义 | 简介专一显示DNA的一种染色法。标本经水解去掉RNA后,DNA的嘌呤—脱氧核糖糖苷键中的嘌呤被酸水解,暴露出了脱氧核糖的醛基,游离的醛基同Schiff‘s试剂反应,呈紫红色。 反应原理Feulgen反应DNA经弱酸(1mol/L HCl)水解后,嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开,并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开,在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与Schiff(无色品红亚硫酸溶液)试剂结合,形成紫红色化合物,使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。紫红色的产生是因为反应产物的分子内有醌基(醌基是一个具有颜色的发色团),所以凡含有DNA的部位,就呈紫红色。而RNA用此法处理后则分解。 Unna染色法1899年Pappenheim 首创了甲基绿-哌洛宁(mehtyl-green-pyronim)染色法。1902年Unna对这一方法进行了改良。 1940年Brachet研究证明用甲基绿—哌洛宁对DNA和RNA有选择性的染色效果。碱性的甲基绿-哌洛宁混合染料处理细胞后,由于DNA、RNA对染料具有的亲和力不同,而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。 DNA被甲基绿染成绿色,RNA被哌洛宁染成红色,这样就能使细胞中两种核酸分布显示出来。 三、材料、试剂和仪器 1. 材料 洋葱根尖, 洋葱鳞茎表皮细胞 2. 试剂 1)Carnoy固定液: 无水乙醇:冰醋酸 = 3:1 2)95% 乙醇 3)70% 乙醇: 95% 乙醇 70mL 加水 25 mL 4) 5% 三氯乙酸(TCA):固体TCA 5g,加水溶解到100 mL。 5) 1N HCl (当量盐酸) 6) Schiff 试剂:煮沸200mL 水,稍冷放入1g 碱性品红,充分搅拌有助溶解,50℃时过滤,置磨口棕色瓶内,向滤液中加1N HCl 20mL ,待25℃时加亚硫酸氢钠或亚硫酸钾 1g ,盖严放暗处,静止勿动,几天后,红色稍退,溶液呈无色或淡黄色,即可使用,如有红色,可加一勺活性炭,振荡过滤,黑布罩好。 7) Unna 染色液(甲基绿-哌洛宁G) 溶液A: 5% 哌洛宁G 水溶液 17.5 mL 2% 甲基绿水溶液 10 mL 蒸馏水 250 mL 溶液 B:0.2mol/L 的pH为4.8的 醋酸盐缓冲液。配法:先将1.2mL 醋酸液用水稀释到100mL,再将2.7g的醋酸钠用水稀释到100mL,然后将醋酸和醋酸钠两液按77mL和100mL的比例混合。 在应用前,把A液和B液按等量混合,混合液可以保存一周时间,时间长效果不佳。 |
随便看 |
百科全书收录4421916条中文百科知识,基本涵盖了大多数领域的百科知识,是一部内容开放、自由的电子版百科全书。