| 词条 | 动物学实验 |
| 释义 | 实验用品常用仪器显微镜低倍镜、高倍镜、油镜、双筒解剖镜 其它放大镜、小型解剖器具、目镜测微尺、物镜测微尺 常用试剂【反应剂】 1、检验葡萄糖 配方一本尼迪克（Benedict）溶液 （1） 在400毫升蒸馏水中溶解85克柠檬酸钠和50克无水碳酸钠。 （2） 在50毫升加热的蒸馏水中溶解8.5克硫酸铜。 把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如果产生沉淀，要过滤。本尼迪克溶液配制后能长期使用（存放时间较久而产生沉淀是，取上层清液使用，不必重新配制）。 本尼迪克溶液用来测试食物、血液和尿中的葡萄糖，可测出0.15 ～0.20%的葡萄糖。这种溶液跟未知物同加热时，如果未知物中有葡萄糖，会形成红色的氧化亚铜沉淀物。 配方二裴林（Fehling）溶液 （1）把34.5克硫酸铜溶于500毫升蒸馏水中。 （2）把125克氢氧化钾（钠）和173克酒石酸钾钠溶解在500毫升蒸馏水中。 上述两种溶液应分别保存。在检测葡萄糖时，使他们等量的混合，加入待测物的试管内，加热到沸腾。如果有葡萄糖，会形成红色的氧化亚铜沉淀物。 2、检查淀粉的试剂 鲁哥氏（Lugol's）溶液（碘液） 取6克碘化钾溶于20毫升蒸馏水中，搅拌到溶解后，加入4克碘，等碘充分溶解，在加入80毫升蒸馏水，贮存在棕色试剂瓶内。 碘液用来测试食物样品或叶片中的淀粉，也用作染色剂，例如可染色鞭毛、纤毛和细胞核等。 3、检查蛋白质的试剂 配方一 米伦（Millon）试剂 在60毫升浓硝酸（比重1.42）中溶解40克汞（水浴加温可助溶），溶解后加入两倍体积的蒸馏水稀释，静置澄清后，取它上层的清液备用。这种试剂可长期保存。 在待测物中加入少量米伦试剂，加热，如果有蛋白质，会出现红色。这种试剂不能用来测定尿中的蛋白质。 配方二 双缩尿试剂 分别配制10%氢氧化钠溶液和1%硫酸铜溶液。 在3毫升待测物中加入1毫升10%氢氧化钠溶液和1滴1%硫酸铜溶液。如果有蛋白质，会出现紫色反应。 4、检查脂肪的试剂 苏丹Ⅲ（Ⅳ）酒精饱和溶液 取0.2克苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ），放入纯酒精中，加热，使它充分溶解，成为饱和酒精溶液，过滤后密闭在试剂瓶内保存备用。 5、酸碱指示剂 配方一酚酞试剂和试纸 酚酞试剂 取1克酚酞，溶解在100毫升60%的酒精溶液里，装在试剂瓶内密闭保存。 酚态试纸 取1克酚酞，溶解在100毫升95%酒精溶液里，加入00毫升蒸馏水。把绿纸条放入酚酞溶液中浸湿后，取出，放在无氨气影响处晾干。 酚泰试剂（试纸） pH值变色范围8.2～10，在酸性和中性溶液中都无色，再碱性溶液中呈深红色。 配方二红蓝石蕊试纸 取市售石蕊1克，放在80毫升10%酒精溶液中搅拌，使它溶解，然后过滤。把滤液分成两份。1份滴入稀磷酸或稀硫酸，到出现红色为止。另1份滴入稀氢氧化钠溶液，到出现蓝色为止。在上述制备的溶液中分别浸湿滤纸条，随后取出滤纸条，放在蔽光处、无酸碱性气体影响的地方晾干，即的红、蓝两种石蕊试纸。 红石蕊试纸在碱性溶液中变蓝，蓝石蕊试纸在酸性溶液中变红。 6、检查二氧化碳的试剂 检查二氧化碳的试剂，可用溴代麝香草酚蓝溶液和石灰水。 配方一 溴代麝香草酚蓝溶液 取0.1克溴代麝香草酚蓝，溶解在100毫升蒸馏水里，滴入少量0.1%氢氧化钾溶液，使它成为弱碱性溶液而呈蓝色。 溴代麝香草酚蓝溶液pH值变色范围是6.0（黄）～7.6（蓝）。待测物中如果有二氧化碳，会形成碳酸而使溶液变成黄色。 配方二石灰水 在蒸馏水中加入生石灰（氧化钙），变加边搅拌，直到加入的生石灰不再溶解，呈饱和状态时为止。在石灰水澄清后，倾出上层清液，用滤纸过滤，放在密闭瓶内保存。 如果测定的物质中有二氧化碳，会生成碳酸钙，使石灰水变浑浊。 7、检查细胞生活力的试剂 检查细胞有无生活力，可用中性红甲基蓝试剂。配制的方法是先分别配制1%中性红溶液和1%甲基蓝溶液，这两种溶液各取1份混合，用来鉴定细胞的死活。该试剂使活细胞的液泡染上红色，而使死细胞全部染成蓝色。 实验动物常见的处理方法实验动物的编号和分组一、编号 实验动物常需要标记以示区别。编号的方法很多，根据动物的种类数量和观察时间长短等因素来选择合适的标记方法。 (一)挂牌法：将号码烙压在圆形或方形金属牌上(最好用铝或不锈钢的,它可长期使用不生锈),或将号码按实验分组编号烙在栓动物颈部的皮带上，将此颈圈固定在动物颈部。该法适用于狗等大型动物。 (二)打号法：用刺数钳(又称耳号钳)将号码打在动物耳朵上。打号前用蘸有酒精的棉球擦净耳朵，用耳号钳刺上号码，然后在烙印部位用棉球蘸上溶在食醋里的黑墨水擦抹。该法适用于耳朵比较大的兔、狗等动物。 (三)针刺法：用七号或八号针头蘸取少量碳素墨水，在耳部、前后肢以及尾部等处刺入皮下，在受刺部位留有一黑色标记。该法适用于大小鼠、豚鼠等。在实验动物数量少的情况下，也可用于兔、狗等动物。 (四)化学药品涂染动物被毛法：经常应用的涂染化学药品有 涂染红色：0.5%中性红或品红溶液 涂染黄色：3-5%苦味酸溶液 涂染黑色：煤焦油的酒精溶液 根据实验分组编号的需要，可用一种化学药品涂染实验动物动物背部被毛就可以。如果实验动物数量较多，则可以选择两种染料。该方法对于实验周期短的实验动物较合适，时间长了染料易退掉；对于哺乳期的子畜也不适合，因母畜容易咬死子畜或把染料舔掉。 (五)剪毛法：该法适用于大、中型动物，如狗、兔等。方法是用剪毛刀在动物一侧或背部剪出号码，此法编号清楚可靠，但只适于短期观察。 (六)打孔或剪缺口法：可用打孔机在兔耳一定位置打一小孔来表示一定的号码。如用剪子剪缺口,应在剪后用滑石粉捻一下,以免愈合后看不出来。该法可以编至1～ 9999号，此种方法常在饲养大量动物时作为终身号采用。 二、分组 (一)分组的原则：进行动物实验时，经常需要将选择好的实验动物按研究的需要分成若干组。动物分组应按随机分配的原则，使每只动物都有同等机会被分配到各个实验组与对照组中去，以避免各组之间的差别,影响实验结果，特别是进行准确的统计检验,必须在随机分组的基础上进行。 每组动物数量应按实验周期长短、实验类型及统计学要求而定。如果是慢性实验或需要定期处死动物进行检验的实验，就要求选较多的动物，以补足动物自然死亡和认为处死所丧失的数量，确保实验结束时有合乎统计学要求的动物数量存在。 (二)建立对照组：分组时应建立对照组。1.自身对照组：是指实验数据而言。实验动物本身在实验处理前、后两个阶段的各项相关数据就分别是对照组和实验组的实验结果，此法可排除生物间的个体差异。2.平行对照组：有正对照组和负对照组两种。给实验组动物某种处理，而给正对照组用同样方法进行处理，但并不采用实验所要求的药物或手段，负对照组则不给任何处理。3.具体分组时，应避免人为因素, 随机把所有的动物进行编号，然后令其双数为A组(实验组),单数为B组(对照组)即可或反之。如果要分若干个组时，应该用随机数字表示进行完全随机分组。 动物的除毛、给药方法一、实验动物的除毛 在动物实验中，被毛有时会影响实验操作与观察，因此必须除去。除去被毛的方法有剪毛、拔毛、剃毛和脱毛等。 (一)剪毛法：剪毛法是将动物固定后，先用蘸有水的纱布把被毛浸湿，再用剪毛剪刀紧贴皮肤剪去被毛。不可用手提起被毛，以免剪破皮肤。剪下的毛应集中放在一容器内，防止到处飞扬。给狗、羊等动物采血或新生乳牛放血制备血清常用此法。 (二)拔毛法：拔毛法是用拇指和食指拔去被毛的方法。在兔耳缘静脉注射或尾静脉注射时常用此法。 (三)剃毛法：剃毛法是用剃毛刀剃去动物被毛的方法。如动物被毛较长，先要用剪刀将其剪短，再用刷子蘸温肥皂水将剃毛部位浸透，然后再用剃毛刀除毛。本法适用于暴露外科手术区。 (四)脱毛法：脱毛法是用化学药品脱去动物被毛的方法。首先将被毛剪短，然后用棉球蘸取脱毛剂，在所需部位涂一薄层，2～3分钟后用温水洗去脱落的被毛，用纱布擦干，再涂一层油脂即可。 适用于狗等大动物的脱毛剂配方为：硫化钠10g，生石灰15g，溶于100ml水中。 适用于兔、鼠等动物的脱毛剂的配方为：1. 硫化钠3g,肥皂粉1g,淀粉7g,加适量水调成糊状；2. 硫化钠8g,淀粉7g，糖4g，甘油5g，硼砂1g,加水75ml；3. 硫化钠8g溶于100ml水中。 二、实验动物的给药 在动物实验中，为了观察药物对机体功能、代谢及形态引起的变化，常需要将药物注入动物体内。给药的途径和方法多种多样，可根据实验目的、实验动物种类和药物剂型、剂量等情况确定。 (一)注射给药法 1. 皮下注射 注射时用左手拇指及食指轻轻捏起皮肤，右手持注射器将针头刺入,固定后即可进行注射。一般小鼠在背部或前肢腋下，大鼠在背部或侧下腹部；豚鼠在后大腿内侧、背部等脂肪少的部位；兔在背部或耳根部注射；蛙可在脊背部淋巴囊注射；狗多在大腿外侧注射，拔针时，轻按针孔片刻，防药液逸出。 2. 皮内注射 此法用于观察皮肤血管的通透性变化或观察皮内反应。 如将一定量的放射性同位素溶液、颜料或致炎物质、药物等注入皮内，观察其消失速度和局部血液循环变化，作为皮肤血管通透性观察指标之一。方法是：将动物注射部位的毛剪去，消毒后，用皮试针头紧贴皮肤皮层刺入皮内，然后使针头向上挑起并再稍刺入，即可注射药液。注射后可见皮肤表面鼓起一白色小皮丘。 3. 肌肉注射 当给动物注射不溶于水而混悬于油或其他溶剂中的药物时,常采用肌肉注射。肌肉注射一般选用肌肉发达、无大血管经过的部位，多选臀部。注射时针头要垂直快速刺入肌肉，如无回血现象即可注射。给大、小鼠作肌肉注射时，选大腿外侧肌肉进行注射。 4. 腹腔注射 先将动物固定,腹部用酒精棉球擦试消毒，然后在左或右侧腹部将针头刺入皮下，沿皮下向前推进约0.5厘米，再使针头与皮肤呈45 度角方向穿过腹肌刺入腹腔，此时有落空感，回抽无肠液、尿液后，缓缓推入药液。此法大小鼠用的较多。 5. 静脉注射 是将药液直接注射于静脉管内，使其随着血液分布全身,迅速奏效。但排泄较快，作用时间较短。 6. 淋巴囊注射 蛙类常采用此法,其皮下有数个淋巴囊，注入药物甚易吸收。腹部淋巴囊和头部淋巴囊常作为蛙类给药途径。一般多选用腹部淋巴囊给药。注射时将针头从蛙大腿上端刺入，经大腿肌层入腹壁肌层，再进入腹壁皮下，即进入淋巴囊，然后注入药液。 (二)经口给药法 1. 口服法：把药物放入饲料或溶于饮水中让动物自动摄取。此法优点在于简单方便，缺点是不能保证剂量准确。一般适用于对动物疾病的防治或某些药物的毒性实验，制造某些与食物有关的人类疾病动物模型。 2. 灌胃法：在急性实验中,多采用灌胃法。此法剂量准确。灌胃法是用灌胃器将所应投给动物的药灌到动物胃内。灌胃器由注射器和特殊的灌胃针构成。小鼠的灌胃针长约4～5cm，直径为1mm，大鼠的灌胃针长约6～8cm，直径约1.2mm。灌胃针的尖端焊有一小圆金属球，金属球为中空的。焊金属球的目的是防止针头刺入气管或损伤消化道。针头金属球端弯曲成20°左右的角度，以适应口腔、食道的生理弯曲度走向。 (三)其它途径给药方法 1. 呼吸道给药：呈粉尘、气体及蒸气或雾等状态的药物或毒气,均需要通过动物呼吸道给药。如实验时给动物乙醚作吸入麻醉、用锯末烟雾制作慢性气管炎动物模型等，特别在毒理学实验中应用更为广泛。 2. 皮肤给药：为了鉴定药物或毒物经皮肤的吸收作用、局部作用、 致敏作用和光感作用等，均需采用经皮肤给药方法。如兔和豚鼠常采用背部一定面积的皮肤脱毛后，将一定的药液涂在皮肤上，药液经皮肤吸收。 3. 脊髓腔内给药：此法主要用于锥管麻醉或抽取脑脊液。 4. 脑内给药：此法常用于微生物学动物实验,将病原体等接种于被检动物脑内，然后观察接种后的各种变化。 5. 直肠内给药：此种方法常用于动物麻醉。兔直肠内给药时,常采用灌肠的胶皮管或用14号导尿管代替。 6. 关节腔内给药：此法常用于关节炎的动物模型复制。 扩展知识SPF级实验动物无特定病原体（Specefic pathogen Free,SPF）动物是指机体内无特定的微生物和寄生虫存在的动物，但非特定的微生物和寄生虫是容许存在的。一般指无传染病的健康动物，是目前国外使用最广泛的实验动物，它的来源，既可来自无菌动物繁育的后裔，亦可经剖胎取后，在隔离屏障设施的环境中，由SPF亲代动物抚育。它不带有对人或动物本身致病的微生物，但不能排除可经胎盘屏障垂直传播的微生物。 由于用疫苗和药物进行预防及治疗，或用淘汰带菌动物来作出SPF动物的方法并不实用（既浪费时间，又难保确除病原），故一般大多先培育无菌动物或悉生动物后，再把其移到有封闭系统设施中去饲育繁殖。原则上SPF动物室内不容许存在病原菌，但在封闭的环境中，难免有很多非病原性微生物会逐渐进入动物机体中去，故亦有人把这个转移过程称之为通常动物化。SPF动物的祖先是无菌动物，按理来说，无菌动物的子宫内和卵中是无菌的，然而，有些微生物实际上是通过其亲代传给胎儿的，因此，培育无菌动物和SPF动物之前，就必须考虑这个问题。即应该严格地选择剖腹产母体，该动物应未感染上规定的各种微生物和寄生虫，最好通过几代连续剖腹，来培育原种无菌动物后再培育SPF动物。 “SPF”一词的含义是不明确的，因为在特定条件下，“非”病原体是可以成为病原体的。而且有些病原体目前缺乏有效的检查手段。“SPF”是多年来使用的名称。目前还没有更好的统一的名称，所以仍沿用。现在有COBS（经剖腹产取得并饲养在屏障中的）、BS（在屏障系统中饲养）、DF（无病）等不同名称，都是指“SPF”动物。 图书信息作 者： 姜乃澄，卢建平 编著出 版 社： 浙江大学出版社 出版时间： 2010-6-1 字 数： 356000 页 数： 218 开 本： 16开 纸 张： 胶版纸 I S B N ： 9787308072540 包 装： 平装 定价：20.00 内容简介根据我校教学实际和多年的教学经验，本实验教材在保留22个实验的基础上，又增加了2个基础实验，分别是：“多细胞动物的早期胚胎发育”及“乌贼的解剖”。同时，着力编写了5种常见无脊椎动物的解剖实验作为附录内容，以增加高校动物学实验材料的选择度，也供有兴趣的学生进一步学习和提高动物学实验技能之用。 为了能使学生在实验过程中最大限度地方便使用，并在实验中做到独立观察和操作，作者重新自绘、改绘及收录了实验用图364，幅，同时增加了复习思考和必要的作业题，以巩固每一个动物实验的步骤、方法、技能，并通过实验作业来加深对理论知识的理解和掌握。 目录实验1 显微镜的使用和动物的基本组织 实验2 原生动物 实验3 多细胞动物的早期胚胎发育 实验4 刺胞动物、扁形动物的基本特征和代表种类 实验5 线虫动物(蛔虫)、环节动物(蚯蚓)的基本特征和代表种类 实验6 蚯蚓的解剖 实验7 河蚌的解剖和常见软体动物Ⅰ 实验8 乌贼的解剖和常见软体动物Ⅱ 实验9 沼虾的解剖和甲壳纲代表种类 实验10 昆虫解剖和节肢动物主要类群 实验11 昆虫纲分类 实验12 棘皮动物的形态结构和无脊椎动物其他代表门类的认识 实验13 文昌鱼和七鳃鳗的形态结构 实验14 鲫鱼的外形和内部器官解剖 实验15 蟾蜍的形态与结构(Ⅰ)骨骼、肌肉、消化、呼吸和泄殖系统 实验16 蟾蜍的形态与结构(Ⅱ)循环和神经系统 实验17 鳖的形态与结构 实验18 鸟类(鸽和鸡)的形态与结构 实验19 家兔的形态与结构(Ⅰ)消化、呼吸、泄殖和骨骼系统 实验20 家兔的形态与结构(Ⅱ)血液循环和神经系统 实验21 鱼纲分类和代表种类 实验22 两栖纲、爬行纲分类和代表种类 实验23 鸟纲分类和代表种类 实验24 哺乳纲分类和代表种类 附录1 圆田螺的解剖 附录2 昆虫幼虫(桑蚕)的解剖 附录3 蜜蜂(工蜂)的解剖 附录4 口虾蛄的解剖 附录5 中华绒螯蟹的解剖 主要参考文献 |
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