土壤DNA提取的难点

原理与操作

试剂盒组成

应用实例

土壤DNA提取的难点

提取土壤中微生物、动植物遗体等的DNA是在分子水平研究生态、环境保护与修复、菌种筛选等的基础。土壤的成分包括矿物质、粘土等无机物、植物及植物的遗体、腐殖物质等土壤有机物以及在土壤中存在的微生物。从土壤中提取的DNA，是微生物、动植物遗体等的总DNA，同时，腐殖物质的性质与DNA很相似，DNA提取过程中会将腐殖等物质一起纯化，采用传统的DNA提取方法来除去腐殖物质等抑制因子是十分困难的。而这些腐殖物质会抑制聚合酶链式反应（PCR）及限制性酶切等。因而，从土壤中提取DNA，腐殖物质等抑制因子的除去干净是重中之重。广州捷倍斯生物科技有限公司根据腐殖物质等特点，发明了高效的腐殖酸吸附剂，再与硅胶柱纯化的技术结合，开发出了高效土壤DNA提取试剂盒（Soil DNA Kit），已为广大客户所采用，完全能够替代价格昂贵的进口产品。

原理与操作

土壤样品加入悬浮缓冲液Buffer C1，并加入玻璃珠与专利的腐殖酸吸附剂Buffer C2，涡旋使土壤充分重悬，腐殖物质充分释放，让吸附剂有效吸附腐殖酸。再加入高效的裂解液Buffer C3并涡旋在玻璃珠的摩擦作用下，裂解土壤中的所有生物包括G+细菌、酵母菌、真菌、藻类、线虫甚至真细菌的孢子、芽孢、动植物遗体等，游离DNA。之后，再加入沉淀剂Buffer C4，离心沉淀除去土壤残渣、吸附有腐殖酸的吸附剂、多糖多酚、绝大部分的色素等，获得清亮的、含有DNA的上清，上清加入异丙醇沉淀获得DNA粗品。粗品中加入ddH2O溶解后，再加入Buffer C5离心进一步除去腐殖酸等杂质，获得上清，往上清加入乙醇后转移到硅胶纯化柱中过柱吸附DNA，除去杂质。再加入漂洗液Buffer WB离心进一步除去蛋白质、腐殖酸等杂质，加入漂洗液DNA Wash Buffer除去盐分等。干燥柱子后加入灭菌去离子水后，离心获得高纯的DNA。

试剂盒组成

产品编号　D8101　D8105　D8106

次数　5　50　100

纯化柱子　5　50　100

收集管　5　50　100

Buffer C1　4ml　39ml　80ml

Buffer C2　700μl　6 ml　12ml

Buffer C3　700μl　6 ml　12ml

Buffer C4　700μl　10ml　16ml

Buffer C5　2 ml　20 ml　37 ml

Glass Beads　2g　20g　40g

Buffer WB　3ml　30 ml　55 ml

DNA Wash Buffer　2ml　20 ml　2x20 ml

说明书　1　1　1

应用实例

左图为不同样品的土壤样品用不同方法所提的DNA

1, 2: SDS高盐酚氯仿抽提法

3, 4: 使用Soil DNA Kit提取

1, 3: 为花基土壤

2, 4: 河边淤泥

用传统法提取的DNA，拖尾严重，无明显的主带，能看到明显的腐殖酸等。而用soil DNA Kit所提的，主带明显。

左图为上面对应的DNA同一片段PCR扩增后电泳图

1,2：SDS高盐酚氯仿法抽提的DNA模板扩增效果

3,4：用Soil DNA Kit提取的DNA模板扩增效果

1, 3: 为花基土壤

2, 4: 河边淤泥