新型的基因分型技术(SNP分型)——巢式PCR-RFLP技术

具有针对性的SNP分型技术，“巢式PCR-RFLP”基因分型技术，不同于传统的只能对于有酶切位点的传统的SNP分型的技术，“巢式PCR-RFLP是针对任意的基因分型技术，使任何位点最终都能进行常规限制性内切酶鉴定；同时该SNP分型技术利用巢式PCR技术，使得多个位点同时进行分析称为可能。即使低浓度的DNA也能够进行快速准确的分型工作。

与现有常规的分型技术相比，其最大的优势包括：

(一)所需DNA浓度低。1-2ng/uL也能完成检测工作，而Taqman技术所需的DNA含量至少5ng/uL。

(二)价格低。由于不需要合成荧光探针，使得该技术比Taqman技术价格低，该优势在对多个位点同时进行分型时更明显。

技基本原理

采用的巢式PCR－RFLP分型技术，其基本原来是利用PCR引物的3’端，对SNP位点附近的碱基进行人为改造，产生一个常规的限制性内切酶识别序列，如SNP rs1321425（rs1321425－来自NCBI的refSNP数据库）的C/G，其任何一个碱基和上下游碱基无法形成一个可直接被限制性内切酶识别的序列，于是我们对SNP位点前的上游碱基进行改造，通过对序列的分析和PCR效果的计算，我们将原本四个碱基AGAT改成CTGC，结合后一个碱基A以及SNP位点G，形成CTGCAG（PstI）酶切识别位点，经测序和序列对比，改造成功。又比如rs9309462和rs4646642，成功的将2个碱基，3个碱基进行成功的改造。