近年来，有报道Midkine(MK)对肿瘤新生血管生成具有明显的调控作用。在国内，MK与食管鳞癌血管生成的有关报道较少。我们在对贲门癌血管生成及食管癌MK观察的基础上[2,3]，应用免疫组化方法检测45例食管鳞癌组织中MK表达及与微血管密度的关系，初步探讨MK与血管生成的可能关系。

1 资料与方法

1．1 资料 收集川北医学院附属医院病理科2003年1月～6月间具有完整临床病理资料的手术切除食管鳞癌45例。男性35例，女性10例，年龄38～72岁（平均57.9岁）。组织学上：高分化鳞癌17例，中等分化22例，低分化6例。术前均无放疗、化疗及其他治疗史。另选10例正常食管组织作对照研究。

1．2 方法

1．2．1 试剂 羊抗人MK单克隆抗体及试剂盒购自美国Santa Crue公司，鼠抗人CD34单克隆抗体及试剂盒购自福州迈新公式。

1．2．2 免疫组化染色方法 将原病理常规石蜡包埋的蜡块作4μm切片，每例作连续切片3张，分别作HE染色、MK，CD34免疫组织化学SP法染色。各组织切片常规脱蜡及水化后，依次按说明书完成免疫组化染色各步骤。所有切片均在同一实验室，由同一技术人员使用同一批号试剂完成免疫组织化学染色。用已知阳性对照片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

1．3 结果判断 MK阳性判断：凡细胞质和/或细胞膜出现清晰的棕黄色染色的细胞即为阳性细胞。结果以阳性细胞所占百分比表示。无MK抗体免疫反应细胞存在为阴性（-），MK抗体免疫反应细胞数≤30%为弱阳性（+），MK抗体免疫反应细胞＞30%为强阳性（++）。每张切片随机选取5个代表性的视野计数100个细胞。肿瘤MVD测定方法：按Weidner报道的方法进行，即先在低倍镜（×100）下观察CD34阳性染色的微血管，选择染色最多的区域，然后在高倍镜（×200）下进行观察，任何被CD34抗体染成棕黄色的内皮细胞或内皮细胞簇，有或无管腔，只要与其他结缔组织成分有明显区别，均作为一个微血管计数，计数5个高倍镜下的微血管数，取其平均值作为微血管密度。

1．4 统计学处理 MK蛋白表达与各临床病理指标间的关系处理采用χ2检验， MVD与临床病理指标间的关系处理采用方差分析。

2 结果

2．1 食管鳞癌组织中MK蛋白的表达特征与MVD的计数和分布特征 在正常食管黏膜组织及癌旁组织中未见MK蛋白表达或仅见微弱表达，而在食管鳞癌中明显表达，主要位于胞质和胞膜上（图略）。45例食管鳞癌中35例为阳性，表达率为77.8%，其中14例为强阳性。 食管鳞癌细胞外间质中尚见纤维组织、小血管内皮细胞及弹力膜着色。血管密集处MK表达较高。食管鳞癌组织中血管内皮细胞阳性染色主要位于癌灶边缘（图略），且在肿瘤浸润前缘血管密度高于其他区域，MVD均值为37.31±6.89。