核酸外切酶 III (E.coli)

概述：该酶作用于双链DNA，沿3'→5'方向逐步催化去除单核苷酸(1)。每次酶与底物结合催化，只有几个核苷酸被除掉，从而在DNA分子群内产生渐进缺失(2)。

尽管可以作用于双链DNA的切刻产生单链gap，但最适底物是平末端或3'凹陷末端DNA。由于对单链DNA无活性，因此3'突出末端抗该酶的切割，拮抗程度随3'突出末端的长度而不同，四碱基或更长的突出完全不能被切割。这种特性对于一端是抗性位点（3'突出端）一端是敏感位点（平端或5'突出端）的线性DNA分子，可以产生单向缺失(3)。

核酸外切酶III的活力部分依赖螺旋结构(4)并根据序列的不同而有差异(C>A=T>G; 文献5)。温度、盐浓度和酶与DNA的比例对酶活力影响很大，应根据不同的反应调整反应条件。

据报道，核酸外切酶III也有RNase H、3'磷酸酶和脱嘌呤/嘧啶-核酸内切酶活性。

应用：

单向巢式缺失

定点突变

链特异性探针的制备

双脱氧测序用单链底物的制备